双酶切，试验中要注意做转化的时候，进行酶连接反应时，需要注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见，一般连接3小时16度。对含有AMPRESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选...

1、产物浓度不同20ul双酶切体系比10ul双酶切体系产物的浓度高。2、DNA反应量不同20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多，进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶...

二、选择正确的酶不言而喻，选择的酶在底物DNA上必须至少有一个相应的识别位点。识别碱基数目少的酶比碱基数目多的酶更频繁地切割底物。假设一个GC含量50%的DNA链，一个识别4个碱基的酶将平均在每44（256）个碱基中...

3、淀粉浓度不宜过高。双酶法水解淀粉用耐高温淀粉酶进行液化，用淀粉糖化酶对液化后液进一步水解为葡萄糖，使DE值达到百分之98以上。

另一个酶应该选择和EcoR1共buffer的，酶切温度要一致

酶切技术5.取10μl消化产物，与2μl6×上样缓冲液混匀，琼脂糖凝胶电泳检测消化效果，电泳条件：约100V30～60min。6结果观察。操作注意事项：1.吸样量一定要准确2.为了不使酶污染而导致浪费，最后才加酶3.要求在冰上...

大于100bp以上，可以在凝胶电泳结果中显示2条带（小于100bp的话与质粒基因碱基数目相差太多，可能无法看清条带）通常做单酶切可以验证酶切位点及线性质粒大小等。通常酶切位点唯一，做双酶切实验验证重组质粒。

我们再根据目的片段和质粒的实际长度对比切割后各自的长度得到我们的目的片段分布位置即可。右侧两个为质粒对照注意事项：1、注意调整切割时间，尽量切割完全。2、电泳时设置对照实验。3、注意单酶切和双酶切位点的区分。

这个看酶的，一般DNA小于1微克，仔细阅读下酶的说明书就好了。查一下双酶切体系的buffer

1防火无水乙醇易燃烧，在使用时注意不要在有明火的使用，安全第一其它的都是小问题