首先qPCR不是很准，特别是对于新手来说。其次，三个平行以上才具有统计学意义，三个生物学重复以上才具有生物学意义。（发表文章时需要）

三个技术重复可以更加确保你数据的准确性。－△△CT方法中参照因子的选择决定于基因表达定量实验的类型。最简单的设计就是把未经处理的样品作为参照因子（calibrator）。经内标基因均一化处理後，通过方法计算，目标基因表达差异...

qpcr中一个反应做三个复孔是三个生物学重复是错误的。相同体系，前期实验CT值正常，本次实验，所有基因扩增CT值皆偏大。这种情况下，需要排查RNA是否存在降解。如何判定RNA是否存在降解呢？可通过1%的琼脂糖凝胶电泳进行检...

提取三次，那个是生物学重复，甚至应该全程做三遍。提取一次检测三次那个叫技术重复样本的采集可能是实验变异的第一个来源，特别是RNA实验，因为mRNA的特性易被样本的采集和处理而不稳定。建议新鲜组织可以保存在冰块中，这对...

看具体情况，最好不要。最好是一起上机分析（一起提完一起逆转）。对于你的结果你可以从以下几个方面分析：1、你分开2次提的RNA逆转时逆转量是否一致2、你的实验内参CT值做的好不好3、加样的误差有没有4、有...

不可以只用两个生物重复。每次一个反应必须有三个技术重复，这是绝对不能少的。一般做处理，需要有生物学重复，我们一般是两个。至于实验重复，一般要求三次，看情况来做。

指测量值与真实值的接近程度。针对低拷贝样本，由于受采样概率的影响，可能会导致结果不准确。为了更可靠地检测低拷贝，可以增大平行实验的重复数，来统计显著性。6.特异性（Specificity）指qPCR实验中只可以检测到目的基因，...

0.5，SD值大于0.5需要重跑，体系配好加样，移液直上直下打进去最好不要歪着，加体系的时候如果有八通道的就用那个，会减小误差。dna量少，都是头直接碰到孔底的。

如果许多数据点都靠均值，那么标准偏差就小；如果许多数据点都远离平均值，则标准偏差就大。实际上，足够多重复次数产生的数据组会形成大致的正态分布。这经常可通过经典的中心极限理论来证明，同分布随机变量在无限多...

重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。二、应用1、基因表达分析：例如结核分岔...