待切割的DNA应当已去除酚、氯仿、乙醇、EDTA、去污剂或过多盐离子的污染，以免干扰酶的活性。DNA的甲基化也应该是酶切要考虑到的因素。关于甲基化的内容，参见第252页至253页之甲基化相关内容。http://blog.bioon.cn/user...

在双酶切载体时2个酶切位点靠得很近，必须注意酶切顺序。有的性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的，则必须先切，否则就可能造成酶切失败。

1.分子克隆是微量操作技术,DNA样品与性内切酶的用量都极少,必须严格注意吸样量的准确性及全部放入反应体系中。2.要注意酶切时加样的次序,一般次序为水、缓冲液、DNA各项试剂,最后才加酶液。取液时,Tip头要从...

1.质粒浓度最好比较高，鉴定要求整个体系里有500-1000ng质粒比较好，太少的话可能酶切下来的目的条带看不清楚于是误以为鉴定失败。2.酶的浓度控制在总体系的5%~10%左右，太高的酶浓度会让保存酶的甘油浓度过高而产生星号...

冰上操作，充分混匀，控制用量，控制反应时间冰上操作：使用过程中注意对酶的保护，以免失活充分混匀：充分混匀才能使酶充分发挥作用控制用量：过多的酶会导致星活性（比如用性内切酶的酶切实验），即酶切错误；PC...

注意：酶通常是最后加。所有4)反应体积需要根据实验目的定，常规的酶切一般要维持在10-50ul，酶切鉴定10-20ul就可以了。5)模板浓度问题：浓度过高，溶液黏度过大，酶不能有效扩散，酶切效果不会好。浓度过低，也会...

1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用...

延长反应时间（1-16小时）酶的星号活性*:改变酶切条件时酶的识别位点专一性下降的现象.性内切酶识别特异性放宽.EcoRⅠ在正常情况下识别GAATTC序列发生切割,但如果缓冲液中甘油浓度超过5%,其识别位点发生松动,可在AATT处...

2.酶的浓度控制在总体系的5%~10%左右，太高的酶浓度会让保存酶的甘油浓度过高而产生星号活性。体系20-50ul即可。酶切37℃，时间3-4h就可以，当然过夜也行。3.可以用空载质粒作为对照组。如果还有其他的疑问，欢迎追问~

冰上操作，充分混匀，控制用量，控制反应时间冰上操作:使用过程中注意对酶的保护，以免失活充分混匀:充分混匀才能使酶充分发挥作用控制用量:过多的酶会导致星活性(比如用性内切酶的酶切实验)，即酶切错误;PCR中...