冰上操作，充分混匀，控制用量，控制反应时间冰上操作：使用过程中注意对酶的保护，以免失活充分混匀：充分混匀才能使酶充分发挥作用控制用量：过多的酶会导致星活性（比如用性内切酶的酶切实验），即酶切错误；PCR...

冰上操作，充分混匀，控制用量，控制反应时间冰上操作:使用过程中注意对酶的保护，以免失活充分混匀:充分混匀才能使酶充分发挥作用控制用量:过多的酶会导致星活性(比如用性内切酶的酶切实验)，即酶切错误;PCR中酶...

1、做转化的时候，进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解.为保险起见，一般连接3小时，16度。2、对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选出来.我的方法...

(l)防止因盖子未盖严密使水汽进入管内,使反应溶液体积大量增加,造成实验失败。(2)防止由于标签脱落,分不清样品类型。5.由于温差原因,往往在盖上有水汽,因此样品酶切完毕或中间取样电泳要离心2秒钟,以集中体积内溶液...

本实验选择双酶切能保证酶的有效切割，双酶切该注意酶切顺序。在双酶切载体时2个酶切位点靠得很近，必须注意酶切顺序。有的性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别...

注意：酶通常是最后加。所有4)反应体积需要根据实验目的定，常规的酶切一般要维持在10-50ul，酶切鉴定10-20ul就可以了。5)模板浓度问题：浓度过高，溶液黏度过大，酶不能有效扩散，酶切效果不会好。浓度过低，也会...

需要注意的是，单酶切质粒的时间过长可能会导致不必要的消化，从而影响质粒的纯度和产量；而时间过短则可能导致酶切不完全，从而影响后续的实验结果。因此，在进行单酶切反应时，需要根据实际情况进行合理的时间控制，并进行...

1.质粒浓度最好比较高，鉴定要求整个体系里有500-1000ng质粒比较好，太少的话可能酶切下来的目的条带看不清楚于是误以为鉴定失败。2.酶的浓度控制在总体系的5%~10%左右，太高的酶浓度会让保存酶的甘油浓度过高而产生星号...

酶切技术5.取10μl消化产物，与2μl6×上样缓冲液混匀，琼脂糖凝胶电泳检测消化效果，电泳条件：约100V30～60min。6结果观察。操作注意事项：1.吸样量一定要准确2.为了不使酶污染而导致浪费，最后才加酶3.要求在冰上...

如果是分开酶切的话，第一个酶切完成后要回收（可用醇回收，效率比较高）后，再进行第二次酶切。做转化的时候，进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见，一般连接3小时，16度；对含有AMP...