mtt法原理和步骤是什么?

发布网友发布时间：2022-04-28 23:28

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热心网友时间：2022-06-25 08:51

检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

（1）单细胞悬液接种于96孔培养板；103-104细胞/孔，每孔培养基总量200微升（96孔培养板每孔容积370微升），37℃、5％。

CO2培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间）。

（2）加入2毫克／毫升的MTT液（50微升／孔）；继续培养3小时。

（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（150微升／孔），将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解。

（4）酶标仪检测各孔OD值（检测波长570纳米）。记录结果，绘制。

扩展资料：

MTT为*化合物,是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下，外源性MT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒( Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。

二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在570nm(参比波长630m)波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MT结晶形成的量与活细胞数成正比。

参考资料来源：百度百科-MTT法