PCR的96孔板与qPCR(荧光定量PCR,real time PCR)的96孔板是一样的吗?
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发布时间:2022-04-29 03:31
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热心网友
时间:2023-10-09 07:56
具体材质有什么不一样不太清楚,但是荧光定量PCR的盖子必须是透明的,不然检测不到信号,至于管子有透明的和不透明的两种,建议使用不透明的,因为荧光染料需要避光。个人觉得最好不要使用普通PCR的96孔板,可能会使结果的扩增效率较低!我们实验室一般会使用机器配套的耗材!
热心网友
时间:2023-10-09 07:56
具体材质有什么不一样不太清楚,但是荧光定量PCR的盖子必须是透明的,不然检测不到信号,至于管子有透明的和不透明的两种,建议使用不透明的,因为荧光染料需要避光。个人觉得最好不要使用普通PCR的96孔板,可能会使结果的扩增效率较低!我们实验室一般会使用机器配套的耗材!
96孔板种板影响荧光信号哪
1、96孔板分为透明和乳白色两种。乳白色适用于新型荧光实时荧光定量PCR设备。荧光信号通常会在顶部聚集,但当qPCR在光源下时必须要保持透明。2、根据裙型设计,96孔板可分为无裙型、半裙型和全裙型三种设计风格。来自不同制造商的实时PCR设备设计有不同的斜角或边缘突出。所以请为PCR仪选择合适的款式。...
实时荧光定量PCR——RT-QPCR
混匀后将每个样按照20ul/孔分装至96孔板中,用封口膜盖好96孔板。将多孔板置于合适的离心机中室温1500g配平离心2min,然后将准备好的96孔板放入罗氏LightCycler 480中 PCR程序设置与运行:(1)双击打开LightCycler 480 Software release1.5.0SP4中登录,自动进入软件界面。(2)点击New Experiment (3)...
做realtime PCR,一块板上一般能做几个基因。
一般用的是96孔板,如果一个基因做4组平行的话,可以做24个基因。但是PCR边缘的孔一般温度都不正常,所以还是不要一次性做那么多的好
多重荧光定量pcr 最多检测多少种
qPCR仪一般是96孔板,最多有5个通道。理论上,你用一个通道作为内标,2个孔分别做阴阳性对照。那么可以做94*4=376个。当然这只是理论上的最大值,实际操作的时候受很多限制,如多重PCR之间的交叉反应导致无法合孔,样本量不足等。具体到肿瘤相关的突变检测试剂盒,目前拿到CFDA注册证的,最多的一个...
一次荧光定量pcr反应能检测多少个突变位点
qPCR仪一般是96孔板,最多有5个通道。理论上,你用一个通道作为内标,2个孔分别做阴阳性对照。那么可以做94*4=376个。当然这只是理论上的最大值,实际操作的时候受很多限制,如多重PCR之间的交叉反应导致无法合孔,样本量不足等。具体到肿瘤相关的突变检测试剂盒,目前拿到CFDA注册证的,最多的一个...
保姆级别qRT-PCR从理论知识(△Ct,△△Ct,2^-△△Ct)到实践操作
在实践中,qRT-PCR的每一步都需精确执行。以96孔板为例,合理的布板设计(表1)是关键。上样时,遵循试剂盒指示,包括引物、cDNA模板和ddH2O等(表2)。qRT-PCR的扩增程序包括变性、退火和荧光数据采集(表3),而溶解曲线的获取也是标准步骤。数据处理采用经典的2^-△△Ct公式(表4),Excel提供...
96孔板如何灭菌?
板子用完在75%的酒精里泡着,用的时候,取出来,甩掉酒精,放在超净台里同时开紫外和吹风,3个小时就可以用了,我一般是上午快下班是吹上,下午来上班时时间刚好
如何通过qpcr看一个基因的表达丰度
参比染料的作用是标准化荧光定量 反应中的非PCR震荡,校正加样误差或者是孔与孔之间的误差,提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者 Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系,也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲,real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样,要变性、退火、...
荧光定量PCR(qPCR)问题汇总
8. 开机顺序:先开电脑,再开定量PCR仪主机,待绿灯亮后开启软件。关机顺序:关闭软件,关闭主机,最后关闭电脑。9. 纯荧光校正是为了让仪器识别各种荧光染料。推荐每半年进行一次校正,以保持准确度。10. 使用光学膜密封96孔板,正确方法是纵向压膜,然后横向,最后边缘按压。11. 单管或8连管实验时,...
定量PCR为什么有的孔没有检测到Ct值
1、加样时没有加进去模板,没有扩增就没有CT值;2、在基线范围之前出现扩增曲线,不会被计算;3、96孔板的孔信息没有编辑进去,不会计算CT值 4、背景荧光值过高导致阈值线上提,而不同基因扩出的扩增曲线高度不一致,平台期相差较大,导致平台期较低的扩增曲线无法读取CT值。