PCR技术介绍
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发布时间：2022-04-29 03:47
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时间：2023-10-09 18:07
PCR技术由三个步骤反复的热循环构成:高温变性、低温退火和适温延伸。高温变性，在高温(95℃)条件下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；低温退火，在低温(37～55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链；适温延伸，即在特异耐热酶-TaqDNA聚合酶的最适温度(72℃)时,引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成新的DNA链[1]。新合成的DNA双链又可作为扩增模板，反复进行解链、退火、延伸三个步骤的热循环，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍, PCR产物得以2n 的指数形式迅速扩增,经过25～30个循环后,理论上可使基因扩增109 倍以上,实际上可达106 ～107 倍。
基于PCR技术的基本原理，多种新的应用模式应运而生，使PCR技术得到进一步的完善，出现了实时PCR (Real-time PCR )、原位PCR ( In site PCR )、反转录PCR (Reverse transcript PCR, RT-PCR )、标记PCR (Labelled Primers PCR,LP-PCR )、彩色PCR (Color Complementation Assay PCR, CCAPCR)、反向PCR (Reverse PCR)、不对称PCR (Asymmetric PCR)、重组PCR (Recombinant PCR) 免疫PCR ( Immuno - PCR)、多重PCR (Multiplex PCR)、膜PCR(membrane-bound PCR)等。这些新的技术使PCR技术具有更广的应用潜力。
1.1 PCR的要素
基本的PCR须具备：
1.要被复制的DNA模板 (Template)
2.界定复制范围两端的引物(Primers). 3.DNA聚合酶 (Taq. Polymearse)
4.合成的原料及水。
PCR的反应包括三个主要步骤，分别是1). Denaturation 2). Annealing of primers, and 3). Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热变性， 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶 (e.g. Taq-polymerase) 的作用下进行引物的延长 (Extension of primers)及另一股的合成。
参考文献：
[1 ]吴乃虎1基因工程原理(上) [ M ]1北京:科学技术出版社,20021
[2 ]郭新竹,宁正祥1PCR技术在食品检验中的应用[J ]1广州食品工业科技,2001 ,17 (2) :60～621
[ 3 ]卢圣栋主编1现代分子生物学实验技术[ M ]1高教育出版社,19931
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时间：2023-10-09 18:07
参考资料：http://ke.baidu.com/view/1272481.htm
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PCR技术由三个步骤反复的热循环构成:高温变性、低温退火和适温延伸。高温变性，在高温(95℃)条件下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；低温退火，在低温(37～55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链；适温延伸，即在特异耐热酶-TaqDNA聚合酶的最适温度(72℃)时,引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成新的DNA链[1]。新合成的DNA双链又可作为扩增模板，反复进行解链、退火、延伸三个步骤的热循环，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍, PCR产物得以2n 的指数形式迅速扩增,经过25～30个循环后,理论上可使基因扩增109 倍以上,实际上可达106 ～107 倍。
基于PCR技术的基本原理，多种新的应用模式应运而生，使PCR技术得到进一步的完善，出现了实时PCR (Real-time PCR )、原位PCR ( In site PCR )、反转录PCR (Reverse transcript PCR, RT-PCR )、标记PCR (Labelled Primers PCR,LP-PCR )、彩色PCR (Color Complementation Assay PCR, CCAPCR)、反向PCR (Reverse PCR)、不对称PCR (Asymmetric PCR)、重组PCR (Recombinant PCR) 免疫PCR ( Immuno - PCR)、多重PCR (Multiplex PCR)、膜PCR(membrane-bound PCR)等。这些新的技术使PCR技术具有更广的应用潜力。
1.1 PCR的要素
基本的PCR须具备：
1.要被复制的DNA模板 (Template)
2.界定复制范围两端的引物(Primers). 3.DNA聚合酶 (Taq. Polymearse)
4.合成的原料及水。
PCR的反应包括三个主要步骤，分别是1). Denaturation 2). Annealing of primers, and 3). Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热变性， 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶 (e.g. Taq-polymerase) 的作用下进行引物的延长 (Extension of primers)及另一股的合成。
参考文献：
[1 ]吴乃虎1基因工程原理(上) [ M ]1北京:科学技术出版社,20021
[2 ]郭新竹,宁正祥1PCR技术在食品检验中的应用[J ]1广州食品工业科技,2001 ,17 (2) :60～621
[ 3 ]卢圣栋主编1现代分子生物学实验技术[ M ]1高教育出版社,19931
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PCR技术由三个步骤反复的热循环构成:高温变性、低温退火和适温延伸。高温变性，在高温(95℃)条件下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；低温退火，在低温(37～55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链；适温延伸，即在特异耐热酶-TaqDNA聚合酶的最适温度(72℃)时,引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成新的DNA链[1]。新合成的DNA双链又可作为扩增模板，反复进行解链、退火、延伸三个步骤的热循环，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍, PCR产物得以2n 的指数形式迅速扩增,经过25～30个循环后,理论上可使基因扩增109 倍以上,实际上可达106 ～107 倍。
基于PCR技术的基本原理，多种新的应用模式应运而生，使PCR技术得到进一步的完善，出现了实时PCR (Real-time PCR )、原位PCR ( In site PCR )、反转录PCR (Reverse transcript PCR, RT-PCR )、标记PCR (Labelled Primers PCR,LP-PCR )、彩色PCR (Color Complementation Assay PCR, CCAPCR)、反向PCR (Reverse PCR)、不对称PCR (Asymmetric PCR)、重组PCR (Recombinant PCR) 免疫PCR ( Immuno - PCR)、多重PCR (Multiplex PCR)、膜PCR(membrane-bound PCR)等。这些新的技术使PCR技术具有更广的应用潜力。
1.1 PCR的要素
基本的PCR须具备：
1.要被复制的DNA模板 (Template)
2.界定复制范围两端的引物(Primers). 3.DNA聚合酶 (Taq. Polymearse)
4.合成的原料及水。
PCR的反应包括三个主要步骤，分别是1). Denaturation 2). Annealing of primers, and 3). Extension of primers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热变性， 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶 (e.g. Taq-polymerase) 的作用下进行引物的延长 (Extension of primers)及另一股的合成。
参考文献：
[1 ]吴乃虎1基因工程原理(上) [ M ]1北京:科学技术出版社,20021
[2 ]郭新竹,宁正祥1PCR技术在食品检验中的应用[J ]1广州食品工业科技,2001 ,17 (2) :60～621
[ 3 ]卢圣栋主编1现代分子生物学实验技术[ M ]1高教育出版社,19931
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参考资料：http://ke.baidu.com/view/1272481.htm
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参考资料：http://ke.baidu.com/view/1272481.htm
