怎么bca法测蛋白浓度标准曲线都不一样
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发布时间:2022-04-27 04:59
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热心网友
时间:2022-06-26 15:15
标准曲线就是每次不一样,因为每一次的反应条件,*的准确度都不一样。所以才要求每次进行测定的时候,需要同时进行标准曲线的测定,这样每次蛋白样品的浓度只能根据平行的标准曲线给出来的公式去计算。
基本上只要能保证R2值大于98%,标准曲线就能用于计算蛋白的含量。追问我做了三个标曲都不一样分别测了三组样,这样计算出来的结果怎么放在一起比较
追答可以比较,只要满足R2值的要求就可以了。如果是采用了不同的方法,就不能比较,但是如果是完全一样的 方法还是可以比较的。另外,如果差异太大了,下一次可以在每一组都测一个同样的样品,这样可以根据这个样品的量判断误差是不是在容许范围之内。
bca法制作的标准曲线点发生较大偏高的原因?
标准品的配制不准确:在BCA法中,标准品的配制非常关键,如果标准品的浓度不准确,会导致标准曲线的点位偏高或者偏低。反应时间过长:在BCA法中,试剂的反应时间对结果有较大影响。如果反应时间过长,会导致反应过度,使得吸光度值偏高。样品中含有干扰物质:某些样品中可能含有干扰物质,如胆固醇、尿素等,...
BCA法测定蛋白浓度结果偏大原因?
bca法测蛋白浓度超过量程肯定不准确的超过量程一般就是是超过了标准曲线的最高点。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。
用bca法测蛋白浓度
3. 加样:将样品和反应液加入相应的反应孔或试管中,充分混合。4. 孵育:将反应液在37℃下孵育30分钟至1小时,使蛋白质与二喹啉甲酸充分反应。5. 测定吸光度:使用分光光度计或酶标仪测定反应液的吸光度值。6. 结果计算:根据标准曲线计算样品中的蛋白质浓度。三、BCA法的优点 1. 灵敏度高:BCA...
用BCA法测蛋白浓度
BCA法是一种常用的蛋白浓度测定方法,其操作流程如下:首先,根据待测样品数量,以1体积BCA试剂B(50体积BCA试剂A的比例)配制工作液。确保工作液在室温24小时内稳定。对于标准品,将其完全溶解后,取10微升稀释至100微升,浓度调整为0.5mg/ml。对于样品,若能完全溶解,也需用相同溶液稀释。标准品也可...
BCA法测定蛋白浓度结果偏大原因?
是胞内蛋白裂解后的检测吗?可根据以下几点进行排除:单独测裂解液是否紫外吸收值也高 是否有细胞膜碎片带入 提取浓缩倍数是否过大
bca法测蛋白浓度超过量程还准确吗
bca法测蛋白浓度超过量程肯定不准确的 超过量程一般就是是超过了标准曲线的最高点,标准曲线是同一蛋白浓度的数值曲线。在一定的浓度范围内,曲线中的点可以连成一条直线,当超出这个范围,因为反应时间或者底物浓度的限制,这些点连成的直线逐渐变成曲线。所以超出标准曲线的点测得的实际值会明显低于其真实...
bca法测蛋白浓度原理
BCA蛋白浓度检测是一个实验,是根据吸光值可以推算出蛋白浓度.碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,两分子BCA螯合一个Cu+。将该水溶性复合物在562nm处的吸收值,与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但...
bca蛋白浓度标准曲线r2要多少
R2>0.99。一般R2值越接近1代表你的标准曲线做得越好,根据标准曲线带入的样品OD值测出的蛋白浓度也越准确。R2值越接近1越好,一般要求为0.99几左右。
如何判断bca法测定蛋白质浓度是否符合朗伯比尔定律
符合。BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合,并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应,使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物,在562nm有强烈的光吸收,且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此可用于蛋白质浓度测定。原理:蛋白质中含有色...
蛋白质定量bca法
BCA法的操作步骤一般包括以下几步:标准曲线的制作:首先,需要制作标准曲线,以确定吸光度与蛋白质浓度之间的关系。通常采用已知浓度的蛋白质溶液作为标准品,将其加入到BCA工作液中,反应后测定吸光度,绘制出标准曲线。样品准备:将待测蛋白质样品溶解在适当的溶剂中,如缓冲液或蒸馏水。注意样品浓度不宜...