发布网友 发布时间:2023-03-06 11:27
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热心网友 时间:2023-12-05 06:17
一个pcr反应体系中不包含的一项内容是:T7 RNA聚合酶。
PCR反应体系主要由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA聚合酶、靶序列DNA和PCR反应缓冲液体系组成。
设计PCR引物时的一般原则:
1、引物长度:一般15~ 30碱基,过短则特异性低;过长则会引起引物间的退火而影响有效扩增。
2、避免内部二级结构,避免序列内有较长的回文结构,使引物自身不能形成发夹结构。
3、G/C和A/T碱基均匀分布,G/C含量在45%~ 55% 之间,引物碱基序列尽可能选择碱基随机分布,避免嘌呤、嘧啶的连续排列。
4、要避免两个引物间特别是3’末端DNA序列互补以及同一引物自身3’末端的序列互补,使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。
5、引物3’端碱基一般应与模板严格配对,并且3’ 端为G、C或T时引发效率较高。
6、引物5’端碱基可不与模板匹配,可添加与模板无关的序列(如*性内切酶的识别位点、ATG起始密码子或启动子序列等)。这些与原初模板并不配对的非互补序列在后续的循不中将被带到双链DNA中去,这样反应产物不仅含有目的序列,同时在目的基因两侧又有了的*酶切位点,用相应的*酶切割后即可将PCR产物定向克隆到载体中。
PCR反应体系的主要成分包括:
PCR就是聚合酶链式反应。再外界情况下完成对核算片段的迅速合成。主要成分:有两端引物,Taq DNA聚合酶、模板DNA,合成DNA的核苷酸。主要程序:模板DNA的变性,两条链解开。引物模板退火,二者碱基配对。DNA聚合酶以四种核甘酸为底物,在引物引导下合成和模板互补的DNA新链。重复此过程。
搜索:fmri基因检测是什么。rna的三个主要功能。反应体系。聚合酶标准。举例说明什么是核酶。什么是引物二聚体。
pcr反应体系的原理:
PCR技术的基本原理类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应。
将待扩增的DN*段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环,使DN*段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。