pet28a和pet30a载体的区别

发布网友发布时间：2022-04-22 09:03

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热心网友时间：2023-09-18 09:14

pet28a和pet30a载体的区别：pet - 28a载体shibiaodazaitima是表达载体，PET-28a表达载体具有T7启动子及lac*子，需要较高的IPTG起始浓度才能启动有效表达。

pet30a质粒类型是大肠杆菌蛋白表达，表达水平较高，克隆方法是多克隆位点，*性内切酶；载体大小是5422 bp。

pet - 28a载体shibiaodazaitima是表达载体，理论上影响是比较大的，原核lb培养不加抗生素的话，很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响目的蛋白的表达量。

所以如果这个蛋白表达培养的实验是第一次做的话，建议重做窢范促既讵焕存唯担沥一遍以保证数据的准确。如果不是第一次做的话，可以对比下之前的表达数据验证下是否有影响。

pET28a载体的目的基因启动子是T7-lac 类型，其后目的基因的表达需要T7RNA聚合酶，在不加IPTG时，不会大量表达T7 RNA聚合酶的同时，阻遏物也会结合于lac启动子上，从而尽可能减少目的基因本底表达。

以前合过相应的引物，是针对pET30a的，5'端用的是BamH1，3'端用的是Xho1 现在要更换载体用pET28a。要插入的基因长度是684bp。

基因的读码框正确，但设计引物时，并没有扩增全长，而是扩增了683bp，即在基因的3'端下游的最末端少扩增了一个碱基，这样一来，插入基因的长度就成了3X+2 的形式。