如何将pet-28a质粒转化为pet-28b质粒
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发布时间：2022-04-22 09:03
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热心网友
时间：2023-06-27 03:22
提取pet28质粒时，怎样才能得到高的浓度
Axugen的试剂盒已经很不错了,要是提不出浓度很高的质粒,可以试试下面的一些方法：
1、增加收菌次数,相对提高了质粒的量,这样的话裂解液的量可以适当增加；
2、裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半的时间都是可以的；
3、过柱子时,吸附的时间尽量长一些,可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的；
4、如果没有必要,不使用去蛋白液,因为每过一遍柱子,其损耗越大,不过这得根据说明的菌种而定；
4、最后洗脱回收的时候,要单方面提高浓度,就要适当减少洗脱液的量,我一般都是回收到40~50 μL的,同时要增加洗脱次数,一般两三次足矣.
如果以上方法都用遍了还无效,就应该考虑菌种本身的问题,是不是冻融或者传代次数过高,导致质粒本身丢失?质粒本身在大肠杆菌的拷贝数是多少?不行的话建议重新将质粒导入到大肠杆菌感受态细胞中.
如何将pet-28a质粒转化为pet-28b质粒
1、增加收菌次数,相对提高了质粒的量,这样的话裂解液的量可以适当增加；2、裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半的时间都是可以的；3、过柱子时,吸附的时间尽量长一些,可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的；4、如果没有必要,不使用去蛋白液,因为每...
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为什么双酶切pet28a老切不干净
- 1.pET28a提出来时分子量就很大,8kb左右,不知道为什么提出来的质粒分子量就狠大,但双酶切后在5.5kb左右
pET28A质粒双酶切后回收不到?
不知道是不是我用的琼脂糖有问题，但是能再连上，你在溶的时候少溶点水，20-30ul左右就够了，65度预热，离完一次后把溶液再吸上来再洗一次，能稍好一点，完了不用检，也检不出来，直接与片段进行连接转化就是了，一般都能长出来，虽然不多，可是一个斑就够了。
为什么pET28a/ HindIII比pET28a/ HindIII慢?
1.一般情况是超螺旋跑得最快、半开环质粒次之、线性最慢，但也有例外。2.pET28a/Hind III、pET28b/Hind III在电泳图上处于同一水平线，pET28a和pET28b应该是相同分子量；pET28a比 pET28a/Hind III慢，应是所说的例外情况，可能与构象有关；pET28a/Hind III与pET28a、pET28b/Hind III与pET28b不...
pet28a是低拷贝质粒,当插入GFP后,会不会影响pet28a-GFP的荧光蛋白强度...
这个主要是看你的GFP蛋白表达量的,和质粒拷贝数多少并没有多大关系.表达量低了,一般是和你的诱导条件有关,你需要优化你的诱导条件.如IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等等.
pet28a作载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选,酶切位点是NdeI和Xho...
我晕，AMP是可以插入的，方法有很多，比如酶切，比如overlapping PCR，不过还是建议用卡那霉素筛选，蓝白斑也可以的。有lacI可以弄蓝白斑的。不过筛选出来的单克隆还是要酶切鉴定的哦~或者去送测个序列~保证是你要的而不是空载体
pET28a载体表达,我的融合蛋白分子量应该多大?计算公式是什么?_百度...
加上前面的融合肽以及终止子之前翻译的一个肽段，最终表达的蛋白分子量是59KD左右
质粒pcr结果很好,为什么酶切却做不出来
既然你的质粒已经提出来了，那么感受态、转化等因素就不必再考虑了。你看看双酶切后载体的位置有几条带，如果是两条，那说明酶切不完全，如果是一条，那说明酶切效率没问题。pET28a分子量为5.6k，你的插入片段为500bp，如果你的质粒完全切开，载体和插入片段的摩尔比为1：1，质量比就是5.6k：0.5k...
