在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒

发布网友发布时间：2022-04-22 09:39

共2个回答

热心网友时间：2023-10-30 09:48

菌液pcr明显假阳性么，这种情况遇到的太多了。当然不能直接诱导表达，建议你在质粒上设计forward primer，连接片段上设计reverse primer，这样就可以排除假阳性了。重做一次克隆也快，你小心点，重头来遍就可以了，不用急，载体回收好，排除质粒污染，少酶切点，载体一点点就够了，时间长点，NEB的3h，一般的酶酶切过夜。

热心网友时间：2023-10-30 09:49

pET 30a 在菌内是偏保守的质粒，拷贝数比较低，建议你做大提质粒，否则带很暗，看不清。

还有，既然你已经菌液PCR有条带了，为什么不诱导表达做western来验证下有没有表达产物？