sbf溶液培养能得到那种磷灰石

发布网友发布时间：2022-04-23 08:52

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热心网友时间：2022-06-18 15:33

材料表面在SBF中形成磷灰石的能力能够反应材料在体内的生物活性，具体检测方法如下：1.SBF配置由于SBF溶液对于磷灰石过饱和，所以配备方法不恰当会导致溶液中磷灰石沉淀产生。整个配备过程需要确保溶液无色、透明，容器表面无沉淀出现，如果过程中产生沉淀，倒去溶液，洗净仪器重新配制。准备一个1000ml的塑料烧杯。首先于塑料烧杯中装好700ml离子交换蒸馏水、一个适当大小磁子，杯口密封以蒸发皿或塑料薄膜。搅拌并调节水温至36.5±1.5C。按表1所列顺序在36.5C恒温下逐个溶解第一到第八个化合物，溶解过程表1配置1000mlSBF溶液时试剂添加顺序、添加量OrderReagentsAmountsContainersPurities（%）Formulaweights1NaCl8.035Weightpaper99.558.44302NaHCO30.355Weightpaper99.584.00683KCl0.225Weightbottle99.574.55154K2HPO4·3H2O0.231Weightbottle99.0228.22205MgCl2·6H2O0.311Weightbottle98.0203.303461.0M-HCl39mlGraatedcylinder——7CaCl20.292Weightbottle95.0110.98488Na2SO40.072Weightbottle99.0142.04289Tris6.118Weightpaper99.0121.1356101.0M-HCl0-5mlSyringe——2.磷灰石形成能力测试对于密质薄片材料，测出样品尺寸并计算样品表面积精确到2mm应用如下公式计算出SBF用量：Vs=Sa/10,Vs（ml）是SBF的体积量，Sa（mm）表示样品的表面积。对于多孔材料，SBF的用量应大于上式计算量准备好塑料瓶或烧杯，装入计算出的SBF体积量加热到36.5C，然后按示意图往里放置样品。笔记：样品在容器中放置有两种情况，如图1(a)，1(b)。少数情况下，SBF溶液会生成同质磷灰石沉积于样品表面。所以如果样品放置是图A1(b)种情况，表征实验应该检测样品的下表面。四个星期内，分别取出恒温浸透不同时长的各组样品，纯水轻盈洗净。然后将样品放入干燥器中常温干燥。图1SBF中样品浸泡示意图1.四唑盐（MTT）比色法：检测细胞存活和生长的方法除前面所介绍的方法外，还可用四唑盐比色法试验（MTT）。此法的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用酶联免疫检测，以在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反应活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。●0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培养基配成1x10^9个/L的但细胞悬液，将细胞接种于96孔培养板中，每孔100ul。●将培养板置CO2培养箱中，在37℃、5%CO2条件下，培养3-5天。●培养3-5天后，每孔加入MTT溶液10ul，继续置培养箱孵育3-6h，终止培养，加10%SDS-HCl100ul/孔，37℃培养数小时，将细胞内与细胞周围的MTT颗粒充分溶解。●用酶联免疫检测仪测定每孔吸光度（OD），选波长490nm。以时间为横轴，OD值为纵轴绘制细胞生长曲线。用此法测细胞活力，为保证结果的准确性，最好在试验前测定每种细胞的贴比率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，再确定每孔细胞接种数和培养时间，以保证培养终止时不会过满。另外，实验时设空白对照，比色时，以空白孔调零。3.2.2CCK-8法CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的*甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。●制备细胞悬液：细胞计数●接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。●37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。●加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。●培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。●测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。