Western杂交中，为何要引入二抗？为何不在一抗上直接加上放射性同位素或者GFP？

发布网友发布时间：2022-04-23 06:24

共2个回答

热心网友时间：2023-10-05 06:57

原因有以下几点：
1. 一抗识别抗原的数量有限，假设一分子的抗体识别一分子的抗原，而一分子抗原上只有3-6个分子的标记的话，最后只能检测到3-6个标记分子。但是如果使用二抗，一分子一抗可以被多个（n个）二抗识别，这个时候每个二抗上带有3-6个标记分子的话，信号就会放大n倍。另外，一抗如果使用单克隆抗体，只能识别抗原的单一表位，而二抗基本上都是多克隆抗体，所以一个一抗体上可以结合很多个二抗。这是使用二抗最基本的原因，多个二抗用来识别一抗，提高检测灵敏度。
2.任何对一抗进行的标记或者修饰，都有可能造成一抗识别抗原能力的下降。实际上更多的二抗是用HRP或者AP来标记的（当然荧光染料的标记也是很重要的一种），但是这些酶或染料标记到抗体上后，采用的方法并不能选择标记在抗体的哪个位置，也就是说，标记物越多，有可能对抗原识别位点造成的影响也就越大，从而引起抗体识别抗原能力下降，也会降低检测的灵敏度。
3.一抗价格昂贵，如果对每一个一抗都进行标记，将是一笔很大的花费，因为一抗都是抗原特异的，但是二抗不一样，二抗可以识别同一物种来源的一抗，成本相对低廉。

另外，同位素现在在WB基本没有人用了，同位素半衰期只有14还是15天，就是标记了，半个月标记就没了，不好保存，而且同位素对实验室有要求的。

热心网友时间：2023-10-05 06:58

敏感性差，一般用间接法，就是一二抗
你只用一抗你检测的最低的靶蛋白是1ng的话，如果你一抗和二抗都用的话，检测最低的靶蛋白0.01ng，具体放大多少倍没研究过，但是至少是100倍以上把追问回答详细点，谢谢了，这是研究生面试的一道题。

追答那不好意思啦，我只知道这个深度