CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 5-15 转染验证
发布网友
发布时间：2022-11-23 15:28
共1个回答
热心网友
时间：2024-12-03 11:30
CRISPR-Cas9学习笔记
Cre-LoxP条件性基因编辑系统--学习笔记
FLP-FRT系统--诱导性基因编辑incible gene editing
CRISPR-Cas9基因敲除sgRNA设计
CRISPR-Cas9（三）--sgRNA设计好之后
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 1
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 2
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 3
CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 day 4
这里我不再放详细的实验步骤了，因为我的实验记录本已经详细的记录了实验步骤和条件，没有多余的时间再重新弄一个，可以自行回去查找文献对照protocol
上次我的day 4做完之后，接着就要转293T细胞来验证一下质粒的效果了。简单描述以下前期的思路（其实是我自己在回顾），先准备好需要用的东西：Cas9 backbone质粒，根据基因靶点将sgRNA设计好（顺带设计一下引物），将sgRNA插入到Cas9 backone质粒中，将质粒转入感受态细胞扩增，提取质粒后酶切验证。接着就是293T细胞转染验证了。
使用常规的转染试剂Lipofectamine 3000或者罗氏等其他公司的转染试剂，按照protocol严格操作即可。
昨天和今天都提取了基因组DNA，就酱紫。
感谢师兄DZ
