木霉几丁质酶的分类和理化性质
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发布时间：2022-12-15 12:30
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时间：2023-04-22 06:03
木霉几丁质酶的定义为所有能通过水解N-乙酰葡糖胺的1，4-β-键分解几丁质或几丁寡糖的酶。根据其酶切方式及最终产物的不同，木霉几丁质酶可分为3类（Dahiya et al.，2006；刘霞等，2008）：
（1）内切几丁质酶（EC3.2.1.14），可随意裂解几丁质和几丁寡聚物并释放可溶性低分子量混合物（GlcNAc）2。
（2）壳二糖酶，可从非还原端裂解几丁质和几丁质寡聚物［（GlcNAc）n］，释放的最终产物主要是（GlcNAc）2。
（3）β-N-乙酰氨基己糖苷酶葡糖胺酶（EC 3.2.1.52），可从非还原端裂解几丁质和几丁质寡聚物，释放N-乙酰葡萄糖胺单体（GlcNAc），而且只有这一种酶可以水解（Glc-NAc）2。该酶对糖苷配基的耐受力较强，可以利用生色底物来检测其酶活性。研究还发现β-N-乙酰氨基葡糖苷酶能够催化转糖基反应，因此在聚合物化学中可以用来合成区域或者立体选择性聚合物。除了外切的β-N-乙酰氨基葡糖苷酶外，也有内切的β-N-乙酰氨基葡糖苷酶（EC 3.2.1.96），它催化高含量甘露糖的糖肽和含有［Man（GlcNAc）2］Asn结构的糖蛋白中N，N’-diacetylchitobiosyl单元的水解，其中一个GlcNAc残基保留在蛋白上，其余的多糖链完整释放。
表10.8中概括了目前木霉中研究较多的几种几丁质酶。木霉几丁质酶多为内切酶，其分子量为20～190kDa，这些酶的分子量已经通过SDS-PAGE进行了测定，从分子量的差异可以看出木霉几丁质酶具有多样性。42kDa的内切几丁质酶是提纯次数最多的一类酶，其次是70～73kDa的N-乙酰-β-D-葡糖胺酶。木霉以真菌细胞壁作为碳源时，细胞滤液中一般含有这两种几丁质酶。另外，还有人纯化了37kDa和33kDa的内切几丁质酶，40kDa壳二糖酶及28kDa 外切几丁质酶，还有人通过荧光染色鉴定了其他的酶，例如102kDa的N-乙酰-β-D-葡糖胺酶。
表10.8 木霉中已纯化的几丁质酶
β-1，4-N-乙酰葡糖胺酶适宜pH值为3.0～7.0，最适pH值为5.5；内切几丁质酶的适宜pH值为4.0～7.0，最适pH值为4.5。β-1，4-N-乙酰葡糖胺酶的最适温度为50℃，内切几丁质酶最适温度为40℃。此外某些木霉几丁质酶还具有抗热性（刘霞等，2008）。乙酰葡糖胺酶 CHIT102及内切几丁质酶 CHIT52，CHIT33 在100℃，3min或55℃，15min的条件下仍能保持酶活性。木霉几丁质酶不需要辅助因子，因此一般受金属离子的抑制作用不明显，但Zn2+对内切几丁质酶有抑制作用，并且对某些蛋白酶（主要是胞外酸性蛋白酶例如天冬酰胺蛋白酶）敏感。木霉几丁质酶还具有糖基化作用（N-glucosylation），这可能与其稳定性有关（Lorito et al.，1998）。
