Topdoc基因检测的主要方向是什么?

发布网友发布时间：2022-04-23 03:56

共1个回答

热心网友时间：2023-07-01 10:24

一种测定细胞内beta-catenin介导的转录活性的方法（经典wnt信号通路）！最早由Hans Clevers实验室构建，但其信噪比不佳，后面由AjameteKaykas改良！原理：经典的Wnt信号通路需要beta-catenin入核，进而与转录因子TCF/LEF结合形成复合物，共同起始下游*基因的转录。据此，科学家通过将数个拷贝的TCF/LEFDNA结合位点（AGATCAAAGGgggta，大写碱基为DNA结合序列，小写的碱基为间隔序列）克隆至含TA病毒最小启动子（minimalTA viral promoter ）的萤火虫荧光素酶报告系统载体中，构建得到TOP-Flash质粒。该质粒可依据beta-catenin的活性强弱，*下游萤火虫荧光素酶的表达量高低。进而将实验简化为检测荧光素酶的活性。同时为了减少误差，该系统还设计了包含突变的TCF/LEFDNA结合位点的对照质粒，即FOP-Flash载体。由于荧光素酶报告系统的高灵敏性，为了减少操作误差，我们在平时使用时，往往还需要连同一个表达海肾荧光素载体，作为内对照，从而消除细胞活力、转染效果、裂解效果等系统误差（同双荧光素酶报告基因检测系统）！具体的TOP或FOP质粒与海肾荧光素载体的比例，需要个人通过实验优化，通常取值的范围在10/1到50/1。数据处理：通常以TOP/FOP的比值表示。公式如下：转染有TOP-Flash和海肾荧光素载体的样本中采集得到的萤火虫荧光值F(Top)/采集得到的海肾荧光值R(Top)