如何分析real-time PCR结果

发布网友 发布时间：2022-04-22 08:46

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热心网友 时间：2024-10-08 18:17

学习做Realtime PCR, 实验结果是出来了,得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间,熔
融曲线基本上也是单峰,但不太会处理这个结果,对着数据发愁.不同的处理方法得到不
同的结果.做的是相对定量,SYBR Green, 选用2^（-△ △ Ct）法
内参基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
目的基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
数据处理的时候,是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到
还有对于内参基因的数据,如果所得Ct 值差值在1 以内,是否可以将所有的内参取平均,
另外对于这个REAL-TIME PCR 的结果除了用EXCEL 处理之外有没有其他比较可信方便的
内参基因： 18s for control, 18s for treatment sample
目的基因： control sample, treatment sample
复孔取平均值△ Ct for control sample = Ct of comtrol sample - Ct 18s for control
△ Ct for treatment sample = Ct of treatment sample - Ct 18s for treatment sample
△ △ Ct = △ Ct for treatment sample - △ Ct for control sample2^(-△ △ Ct)2^(-△ △ Ct) =1 means miRNA expression no change2^(-△ △ Ct) 1 means expression increase after treatment

热心网友 时间：2024-10-08 18:10

目的：检测某处理因素对瘤细胞某mRNA表达的影响
方法：瘤细胞，分组处理，于处理后的时间点（0hour,1hour, 2hour, 4hour, 6hour,12hour,24hour)分别将其收集，提总RNA，测浓度，取同量的RNA做RT转cDNA，再做real-time PCR.
每个时间点都有beta-actin做对照

热心网友 时间：2024-10-08 18:16

学习做Realtime PCR, 实验结果是出来了,得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间,熔
融曲线基本上也是单峰,但不太会处理这个结果,对着数据发愁.不同的处理方法得到不
同的结果.做的是相对定量,SYBR Green, 选用2^（-△ △ Ct）法
内参基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
目的基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
数据处理的时候,是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到
还有对于内参基因的数据,如果所得Ct 值差值在1 以内,是否可以将所有的内参取平均,
另外对于这个REAL-TIME PCR 的结果除了用EXCEL 处理之外有没有其他比较可信方便的
内参基因： 18s for control, 18s for treatment sample
目的基因： control sample, treatment sample
复孔取平均值△ Ct for control sample = Ct of comtrol sample - Ct 18s for control
△ Ct for treatment sample = Ct of treatment sample - Ct 18s for treatment sample
△ △ Ct = △ Ct for treatment sample - △ Ct for control sample2^(-△ △ Ct)2^(-△ △ Ct) =1 means miRNA expression no change2^(-△ △ Ct) 1 means expression increase after treatment

热心网友 时间：2024-10-08 18:10

目的：检测某处理因素对瘤细胞某mRNA表达的影响
方法：瘤细胞，分组处理，于处理后的时间点（0hour,1hour, 2hour, 4hour, 6hour,12hour,24hour)分别将其收集，提总RNA，测浓度，取同量的RNA做RT转cDNA，再做real-time PCR.
每个时间点都有beta-actin做对照

热心网友 时间：2024-10-08 18:16

学习做Realtime PCR, 实验结果是出来了,得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间,熔
融曲线基本上也是单峰,但不太会处理这个结果,对着数据发愁.不同的处理方法得到不
同的结果.做的是相对定量,SYBR Green, 选用2^（-△ △ Ct）法
内参基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
目的基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
数据处理的时候,是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到
还有对于内参基因的数据,如果所得Ct 值差值在1 以内,是否可以将所有的内参取平均,
另外对于这个REAL-TIME PCR 的结果除了用EXCEL 处理之外有没有其他比较可信方便的
内参基因： 18s for control, 18s for treatment sample
目的基因： control sample, treatment sample
复孔取平均值△ Ct for control sample = Ct of comtrol sample - Ct 18s for control
△ Ct for treatment sample = Ct of treatment sample - Ct 18s for treatment sample
△ △ Ct = △ Ct for treatment sample - △ Ct for control sample2^(-△ △ Ct)2^(-△ △ Ct) =1 means miRNA expression no change2^(-△ △ Ct) 1 means expression increase after treatment

热心网友 时间：2024-10-08 18:14

目的：检测某处理因素对瘤细胞某mRNA表达的影响
方法：瘤细胞，分组处理，于处理后的时间点（0hour,1hour, 2hour, 4hour, 6hour,12hour,24hour)分别将其收集，提总RNA，测浓度，取同量的RNA做RT转cDNA，再做real-time PCR.
每个时间点都有beta-actin做对照