慢病毒包装的原理

发布网友发布时间：2022-04-22 14:45

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热心网友时间：2023-05-10 14:29

病毒包装的原理，就是有遗传物质有外壳蛋白，在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增，也只能在293A里扩增，其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的，野生型的慢病毒载体是可以复制的，但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。简单来说，就是把相应的涉及相应功能的元件进行替换或者删除。慢病毒包装系统简介及应用

一、慢病毒包装简介及其用途

慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对*细胞和非*细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的*。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。 U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。构建载体前通常要通过合成 siRNA 的方法，寻找高效的 siRNA ，然后从中挑选符合载体要求的序列，将其引入 siRNA 表达载体

热心网友时间：2023-05-10 14:29

慢病毒包装

慢病毒载体（Lentivirus vectors）的特性：在非*和*细胞中稳定整合、转基因的长期表达、低免疫原性，使其成为基因治疗的理想基因转移载体。转基因可以在非*或终末分化的非常静止的细胞（例如神经元）中实现。我们的慢病毒载体来源于HIV-1病毒，序列经过精心优化，提高了生物安全性、基因表达水平和病毒转导效率。慢病毒颗粒通常是在包装细胞*表达病毒体包装元件和载体基因组来产生的。vectorbuilder开发出了一系列专有技术和试剂，从病毒滴度、纯度、活性以及一致性等方面提升了慢病毒包装工艺水平。

非整合型慢病毒包装

整合酶缺陷型慢病毒（Integrase-deficient lentivirus，简称IDLV），也称为非整合型慢病毒（Non-integrating lentivirus，简称NILV），是一种源自传统慢病毒的新技术。IDLV的整合功能缺失是由整合酶蛋白中的点突变导致的。整合酶没有了功能，原病毒DNA就不能插入细胞基因组，而是作为游离体存在于细胞核中。随着细胞*，原病毒DNA被逐渐稀释并丢失。与传统慢病毒相比，IDLV降低了插入诱变的风险，适用于CRISPR基因编辑、iPS干细胞等。