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Easy-T-vector 与蓝白筛选
发布网友
发布时间:2023-04-25 04:48
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热心网友
时间:2023-10-14 10:17
线性化的T-载体末端多出T,无法自连为环状,你用线性化的T-载体直接转化DH5a,T-载体进入细胞后仍然是线性的,所以质粒无法编码β-半乳糖苷酶N端的146个氨基酸,也就不能形成a-互补,所以形成白斑。但形成的白斑应该很少,因为线性化的质粒导入细胞是比较困难的。这一点是正常的。你的理解也很正确。
为何产品说明书上说可以做蓝白斑筛选呢?
因为我们用T-载体都是同外源基因连接后才导入细胞的,切线性化质粒很难导入细胞,所以几乎可以认为在IPTG-X-gal平板上出现白斑的就是阳性克隆(并非百分百是),所以说明书上也就这么说了。
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