PCR技术的原理

发布网友发布时间：2022-05-04 10:14

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热心网友时间：2022-06-21 02:24

聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)是1985年美国Cetus公司Mullis等建立的最新生物技术。
PCR的原理PCR扩增首先需要一对引物，根据待扩增区域两端已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸引物，这一单链引物的序列将决定扩增片段的特异性和片段长度。PCR反应体系由基因组DNA、一对引物、dNTP、TaqDNA聚合酶、酶反应缓冲体系及必需的离子浓度等所组成。反应在加热变性，使基因组双链DNA变性为单链(变性)后，通过降低温度使特异性引物与互补的DNA序列特异性结合(退火或称复性)，发生了互补结合的引物在耐高温的TaqDNA聚合酶作用下，以基因组单链DNA为模板，从引物端开始按5’-+37方向合成DNA链(延伸)。这样经过一个周期的变性——复性——延伸等三步反应就可以产生倍增的DNA，反复n周期后，理论上就能扩增为2“倍，一般经过30～40周期就能扩增100万倍以上。

参考资料：楚玉荣，罗佳滨，陈萍主编.医学遗传学.人民卫生出版社,2007.8

热心网友时间：2022-06-21 02:25

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在聚合酶链式反应实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。这种批量复制DNA的技术就叫做PCR技术。

热心网友时间：2022-06-21 02:26

首先你要知道DNA复制的原理：1、DNA双链在解旋酶的作用下解链变为单链，作为复制的模版；2、引物酶（一种RNA聚合酶）合成一段RNA序列作为复制的引物；3、以dNTP为原料，由DNA聚合酶催化反应，根据碱基互补配对的原则进行复制。

然后说说PCR的原理：1、DNA双链在高温下也会变成单链（称为变性，变性温度与GC含量相关）；2、加入合成好的引物（一般由生物公司合成）、dNTP和DNA聚合酶（Taq酶，从Thermus aquaticus细菌中提取的耐热DNA聚合酶）可以进行DNA的体外扩增。