植物的超低温保存玻璃化为哪几个种类?
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发布时间:2022-04-21 04:21
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时间:2022-06-17 23:11
常规超低温保存:常规超低温保存通过*预培养、冷冻保护剂处理时间、降温速度和转移温度等关键环节,创造合适的脱水程度,实现超低温保存。
A.预培养和低温处理:茎尖、愈伤组织、悬浮细胞、花粉、胚等器官或组织,均可作为超低温贮存的材料。
在贮存前往往应对外植体进行预培养和低温处理,以提高组织细胞的抗寒力。预培养一般需712d,培养基中加入能提高抗寒力的物质如山梨糖醇、脱落酸或增加糖浓度等。
低温处理的做法一般是将外植体放在23摄氏度低温下锻炼数天,处理后可明显提高材料的抗冻力。有的甚至将植物材料在放入液氮,经过-20摄氏度或-70摄氏度的低温预冻,仍可取得较好效果。B.冷冻保护剂处理:超低温处理前,还必须进行冷冻保护剂处理。其方法是:先将保护剂预冷至0摄氏度,等体积与培养基混合,静置3060min。这是因为DMSO等保护剂有毒,所以必须在0摄氏度下处理,而且处理时间不宜过长,一般不超过1h。C.降温冷冻:材料以冷冻保护剂处理3060min后,应立即降温冷冻,最后达到液氮低温保存。从0-196摄氏度的降温过程。
D.化冻方法:化冻是再培养能否成功的关键。升温给细胞造成的伤害并不亚于降温带来的伤害。升温损伤主要是降温过程中形成的小冰晶重新增长的结果,同时化冻过慢,从-1960摄氏度的升温过程中,细胞内玻璃化水可能会发生次生结冰,从而破坏细胞结构,导致死亡。
植物的超低温保存玻璃化为哪几个种类?
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