原核表达载体和真核表达载体的区别
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发布时间：2022-04-21 02:44
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时间：2022-06-17 12:51
一、表达载体不同：
原核表达载体构建重组表达载体：
1、载体酶切：将表达质粒用*性内切酶（同引物的酶切位点）进行双酶切，酶切产物行琼脂糖电泳后，用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体，具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。
二、表达实现方式不同：
原核表达载体测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
真核表达载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。
三、获得目的基因方式不同：
pEGFP-N1载体从结构上看，质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞*时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。
原核表达载体获得目的基因：
1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板，按基因序列设计一对引物（在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点），PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法：提取总RNA，以mRNA为模板，逆转录形成cDNA第一链，以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。
参考资料来源：百度百科-原核表达载体
参考资料来源：百度百科- 真核细胞表达载体
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时间：2022-06-17 12:51
真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的，可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒，外源基因整合到基因组中的，所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。
如果说载体的重组，没区别，都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。
表达的话，一般原核是直接转化细菌通过ISPG诱导进行表达，蛋白表达后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在，这种蛋白如果是真核基因来源，不一定拥有相应的蛋白生物活性，因为原核表达缺少真核转录后的蛋白修饰机制。但是原核表达的蛋白容易纯化，很容易获得纯化蛋白做为免疫原等进行使用。
而真核表达则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体， 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解，这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组，通过质粒上带的筛选标记，如G418等，通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性，因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。而不能用于纯化蛋白。
此外，真核表达还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统，其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒（特殊质粒，专用于杆状病毒表面展示系统）给昆虫细胞，然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞，来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组，获得目的基因，并且最终表达于病毒子的表面，所以成为表面展示系统。
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时间：2022-06-17 12:52
比如说启动子，终止子在两种表达系统中是不一样的。
带有真核表达元件的是真核载体，能在真核生物内表达；
带有原核表达元件的是原核载体，能在原核生物内表达。
热心网友
时间：2022-06-17 12:53
比如说启动子，终止子在两种表达系统中是不一样的。
带有真核表达元件的是真核载体，能在真核生物内表达；
带有原核表达元件的是原核载体，能在原核生物内表达。
两者都具有的为穿梭载体。
1)真核表达载体和原核表达载体就是能在真核生物或原核生物中表达的载体,它们一般都带有能在真核生物或原核生物中表达的必需表达元件;
2)真核表达和原核表达的目的都是为了能够大量获得自己所需要的目的基因的表达产物,最好有生物活性,以便下一步的实验需要.
3)原核表达载体一般只能在原核生物中表达外源基因,但有些穿梭载体可以分别在真核和原核生物中表达它们的表达元件.
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时间：2022-06-17 12:53
