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如何判定荧光定量结果的真实性

发布网友 发布时间:2022-04-20 22:18

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热心网友 时间:2023-04-27 15:23

如何判定荧光定量结果的真实性
荧光定量PCR(Real-time PCR)是目前基因表达定量分析的重要检测手段,已经为越来越多的研究者所采用。“好的开始是成功的一半”,Perrez-Novo等(Perrez- Novoet al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续PCR定量结果的准确性是非常重要的,而高质量RNA是获得高质量cDNA的必要条件,所以本文着重介绍一下如何获得高质量cDNA。
高质量cDNA应具备以下几个特点:无基因组DNA残留、能准确反应出样本真实的转录情况和信息完整且浓度适当等特点。
高质量cDNA应保证无基因组DNA残留
在提取RNA的过程中,常常会有基因组DNA的残留,从而导致实验结果的不准确性或假阳性结果的出现。 2008年,Nature Protocol的一篇关于荧光定量PCR实验研究的文章1中明确指出,在合成cDNA第一链之前应去除基因组DNA残留,以免cDNA中有基因组DNA的存在,影响高灵敏度的荧光定量PCR实验结果。

热心网友 时间:2023-04-27 15:23

如何判定荧光定量结果的真实性
荧光定量PCR(Real-time PCR)是目前基因表达定量分析的重要检测手段,已经为越来越多的研究者所采用。“好的开始是成功的一半”,Perrez-Novo等(Perrez- Novoet al., 2005)曾报道获得高质量RNA对后续PCR定量结果的准确性是非常重要的,而高质量RNA是获得高质量cDNA的必要条件,所以本文着重介绍一下如何获得高质量cDNA。
高质量cDNA应具备以下几个特点:无基因组DNA残留、能准确反应出样本真实的转录情况和信息完整且浓度适当等特点。
高质量cDNA应保证无基因组DNA残留
在提取RNA的过程中,常常会有基因组DNA的残留,从而导致实验结果的不准确性或假阳性结果的出现。 2008年,Nature Protocol的一篇关于荧光定量PCR实验研究的文章1中明确指出,在合成cDNA第一链之前应去除基因组DNA残留,以免cDNA中有基因组DNA的存在,影响高灵敏度的荧光定量PCR实验结果:
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