怎样进行草莓的组织培养繁殖？

发布网友发布时间：2022-04-20 21:59

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热心网友时间：2023-06-21 13:40

专家解答

组织培养繁殖法是利用细胞的全能性和组织的再生能力，切取草莓植株的部分组织或器官，在无菌条件下，接种到人工配置的培养基上，使之发育成完整的植株。草莓组织培养繁殖的优点是：

（1）植株健壮结果好任何植物在长期的无性繁殖过程中都容易感染病毒，受到病毒感染的植株生活力衰退，产量降低，品质变劣。而组织培养繁殖的整个过程是在无菌环境中进行的，对于做繁殖材料的茎尖也要进行脱毒处理，这样所得的秧苗不含或少含病毒，比一般秧苗叶片大而厚，叶色浓绿；生长健壮且整齐一致；结果期延长3周，平均增产20%左右；果个大，品质优。

（2）繁殖速度快利用组织培养法繁殖草莓，一年内一个分生组织可获得几千株甚至几万株秧苗，这种繁殖方法对加速新品种推广，特别是对抽生匍匐茎低的品种的繁殖更为有利。

（3）繁殖不受季节*组织培养是在操作室和配套温室中进行的，不受外界环境条件的影响，一年四季均可生产，在人工控制条件下，可进行工厂化育苗。

（4）节省土地，利于种质保存用组织培养法繁殖是在实验室中进行的，对露地占用少。所以，不仅节省土地，便于管理，而且对保存种质资源更加安全。

组织培养繁殖有以下几个步骤：

（1）配制培养基常用的培养基是MS培养基、怀特培养基，其配方见表11。

①配制母液。将营养成分中大量元素扩大10倍，微量元素扩大100倍。把大量元素、微量元素、有机生长物质分别贴上标签，放在3～5℃环境中待用。植物生长调节剂如6-苄基嘌呤、激动素用少量0.5摩尔/升的盐酸溶解，萘乙酸用酒精溶解，溶解后加水稀释。

②培养基配制。将所要用的琼脂加热溶解，加入蔗糖搅拌，配制成琼脂-蔗糖液。然后按量把配制好的母液置入准备好的容器中，接着把琼脂-蔗糖液也置入同一容器中，充分搅拌，定容到规定的体积。

③调整酸碱度。琼脂培养基加热灭菌时，pH会降低0.1～0.3，所以在加热前用0.1摩尔/升的盐酸或氢氧化钠液调整培养基的pH。

④高温消毒。把培养基趁热注入试管或三角瓶内，注入量为容器容积的1/3左右，塞上棉塞，缚紧，放入高压蒸汽锅内灭菌。蒸汽锅压力维持在78.5～98千帕，时间为10～20分钟。

单位：毫克/升序号化合物MSWhite1*钾（KNO3）1900802*铵（NH4NO3）1650-3四水*钙[Ca（NO3）2·4H2O]-3004硫酸钠（Na2SO4）-2005七水硫酸镁（MgSO4·7H2O）3707206七水磷酸二氢钠（NaH2PO4·7H2O）-16.57磷酸二氢钾（KH2PO4）170-8氯化钾（KCl）-659一水氯化钾（KCl·H2O）440-10四水硫酸锰（MnSO4·4H2O）22.37.011七水硫酸锌（ZnSO4·7H2O）8.63.0表11营养基配方序号化合物MSWhite12硫酸铁[Fe2（SO4）3]-2.513五水硫酸铜（CuSO4·5H2O）0.0250.00114氧化钼（MoO3）-0.00115硼酸（H3PO3）6.21.516碘化钾（KI）0.830.7517六水氯化亚钴（CoCl2·6H2O）0.025-18二水钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）0.25-19肌醇10010020烟酸0.50.321盐酸硫胺素0.40.122盐酸吡哆醇0.50.123甘氨酸2.0324蔗糖300002000025琼脂100001000026pH5.85.6表11营养基配方（续）-1（2）选材与消毒选取健壮植株上充实、小叶尚未展开的匍匐茎先端3厘米左右的幼嫩组织作培养材料。将材料用洁净流动的清水冲洗0.5～1个小时，然后用70%的酒精浸泡1分钟，再用0.1%升汞水浸泡7分钟，最后用无菌水冲洗2～3次。

（3）接种在无菌的超净工作台上，用镊子去掉茎尖组织的叶片，在解剖镜下，用消过毒的刀片切取茎尖分生组织0.3～0.5毫米大小，放入备用的培养基上。

（4）初代培养将接过种的试管或三角瓶放置在温度25～28℃，光照强度2000勒克斯，每天照射10小时的无菌条件下进行培养。10～15天接种物开始萌发，再经7～10天接种物产生很多小芽，形成芽丛；3个月后，无根苗长至3～4厘米。这时初代培养结束。

（5）继代培养当初代培养的无根苗长到3～4厘米时，将其取出进行生根培养。把剩下没达到3～4厘米的芽，按3～4个芽为一个芽丛重新分开，再重新植入同种培养基（初代培养基）上进行增殖培养，这种增殖培养称继代培养。1个月左右新的一批无根苗又繁殖出来，再用同种方法进行下一次继代培养。

（6）生根培养将初代培养或继代培养的高度已达到3～4厘米的无根苗，扦插到珍珠岩内进行生根培养。生根培养的苗床温度保持在18～20℃，空气湿度在80%以上，珍珠岩中要喷洒营养液和生根素。20天以后，当秧苗长出3～4条，长度达1.5～2.5厘米的根系时，可进行移栽锻炼。目前国内比较常用的营养液配方见表12。

化合物名称园试配方化合物用量毫克/升毫摩/升元素含量（毫克/升）大量元素总计（毫克/升）Ca（NO3）29454N112Ca160KNO38098N112K312NH4H2PO41534N18.7P41MgSO4.7H2O4932Mg48S64Na2Fe-EDTA20-Fe2.8H3BO32.86-B0.5MnSO4·4H2O2.13-Mn0.05ZnSO4·7H2O0.22-Zn0.05CuSO4·5H2O0.08-Cu0.02（NH4）6Mo7O24·4H2O0.02-Mo0.01N243P41K312Ca160Mg48S64表12营养液配方注：参引2001年张福墁主编《设施园艺学》。

（7）移栽当秧苗已长出3～4条1.5～2.5厘米长新根时，可移栽到室外进行土壤育苗。移栽后的前两周应覆盖薄膜与覆盖遮阳网，保持土壤和空气湿度，缓苗后撤除覆盖物。

提示板

组织培养能培育优质的壮苗，但技术要求比较严谨，目前还只在科研院所进行。随着科技的进步，大型繁育场将逐步得到推广。无毒育苗将是草莓苗木繁育的主要手段。

热心网友时间：2023-06-21 13:40

草莓的组织培养主要是茎尖培养，由一个茎尖培养成为一个完整的草莓植株，需要进行如下程序：

（1）配制培养基培养基是向培养植物提供养分的基质，由植物生长所必须的大量元素、微量元素、有机物质、蔗糖、琼脂等物质组成，称为基本培养基。为了调节培养物的生长和分化，还需要附加不同的植物生长调节剂，如萘乙酸、吲哚丁酸、6-苄基嘌呤、2，4-D等。将各种物质配制好，装入三角瓶或试管中，高压消毒后备用。

（2）外植体的处理和接种选择强壮的草莓匍匐茎顶芽，采下后带到室内，除去外叶，用流水冲洗0.5～1小时，用75%的酒精灭菌5分钟，用无菌水冲洗3～5次，再用0.1%升汞浸泡3～5分钟，最后用无菌水冲洗5～6次。将消毒后的顶芽，在超净工作台上切取0.3～0.4毫米匍匐茎茎尖（所取茎尖越小，脱毒效果越好，但成活率也越低。各地经验证明，以带一个叶原基的生长点，长度为0.3～0.4厘米为宜，成活率较高，脱毒效果也较好），接种到装有配制好的新鲜培养基的三角瓶内。草莓茎尖培养所用分化培养基，以MS作基本培养基，附加一定浓度的BA和NAA，以诱导茎尖组织的*和生长。接种后将三角瓶放在培养室的培养架上，室内温度一般保持在23～25℃，用光强为2000勒克斯的日光灯照射，光照时间为16小时。在这样的条件下培养30天以上，即可分化长出1.5～2厘米高的无根小苗（芽丛）。

（3）继代培养为了扩大繁殖系数，将培养出的无根小苗（芽丛）进行分离，转换新鲜培养基（培养基成分与分化培养基相同），分别放入5～10瓶培养基中进行扩大繁殖，经过20天左右，每个瓶中又可长满无根小苗。经过多次继代培养，使增殖的数量达到一定的要求后，即可将无根小苗转入生根培养基上，使其生根，形成完整植株。

（4）生根培养将生长健壮，苗高2.5～3厘米的无根苗移到生根培养基上进行培养，诱导生根。生根培养基与增殖培养基的不同之处是降低了细胞*素类激素的浓度，加入了有利于生根的激素，如吲哚丁酸（IBA）等。一般无根苗在生根培养基中培养2～4周后便可生根。当生根幼苗长到3～4厘米时即可进行驯化移栽。

（5）驯化移栽打开生根小苗瓶口，在温室内放置2～3天，取出后洗净根部的培养基，移栽到2/3腐殖土加1/3河沙的炼苗基质上，温度保持在15～25℃，相对湿度85%～90%，并适当遮荫。后期逐渐通风，增加光照，2～3周后即锻炼培养成组培苗，一般不带病毒，可移栽到田间，进入育苗圃培育。据试验，经上述方法炼苗，成活率可达90%以上，且无缓苗期，秧苗生长旺盛。