发布网友 发布时间:2022-05-06 09:33
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热心网友 时间:2022-06-29 06:35
病毒名称:香蕉线条病毒Bananastreakvirus(BSV)。
分类地位:杆状DNA病毒属Badnavirus,花椰菜花叶病毒科Caulimoviridae。在国际病毒分类委员会(ICTV)中的编码为00.015.0.05.002。
病毒提纯:取新鲜香蕉病叶(剔除掉主脉)100g,切成小块,在液氮中研磨;用0.2mol/L(pH6.0)磷酸缓冲液(内含0.5%亚硫酸钠,2%PVP-40,10mmol/LEDTA)按4∶1对入在咖啡机上将样品拌成匀浆状,接着用磁力搅拌器在4℃搅拌1h,用三层纱布过滤提取液,滤液用Bekman高速离心机4℃下12000r/min离心20min,为进一步除去植物残渣,在上清液中加入PEG-6000及NaCl,使其浓度分别为6%(V/W)、3%(V/W),4℃下磁力搅拌1h,4℃下静置3h;接着4℃下12000r/min离心,取沉淀用0.01mol/L(pH7.2)磷酸缓冲液(含1.5%NaCl,0.5%(V/V)TritonX-100),4℃下磁力搅拌1h,4℃下12000r/min离心20min,上清液用Bekmantype55.2转子4℃120000r/min离心2h;沉淀用0.01mol/L(pH7.2)磷酸缓冲液重悬,加入等体积的预冷氯仿,4℃10000r/min离心5min;吸取水相,4℃12000r/min离心5min,上清液即为病毒粗提液。
病毒理化特性:
①病毒粒子。杆状病毒,27nm±3nm*119nm±8nm(Lockart,1986)。沉降系数约200S,分子量未知。制备物的A260/A280为1.26。
②核酸。环状双链DNA,7.3~7.7Kb,基因组每条链都被一不连续专一性位点所打断。
③蛋白。有3个开放阅读框,其中ORFⅠ和ORFⅡ各编码一个20.8ku和14.5ku未知蛋白,ORFⅢ编码一个208ku的聚合蛋白,切割成MP、CP、RP和天冬氨蛋白酶,但切割位点不明确。
株系:根据血清学性质BSV可划分为许多株系,株系间存在很大的血清学差异性。有些株系与已制备的BSV抗血清不发生反应,株系间DNA序列也存在很大差异。通过免疫诱捕、PCR和三抗体夹心法进行检测,结果显示BSVOnne株系分布十分广泛。在澳大利亚,根据寄主品种不同也鉴定了几个株系,分别为BSVCav、BSVMys、BSVGF和BSVRD。对这些株系的PCR产物进行测序,结果表明株系间序列同源性较低。