如何检测基因表达水平

发布网友发布时间：2022-04-21 07:48

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热心网友时间：2022-06-18 19:18

1 western bloting
a.将编码目标蛋白基因通过载体进行体外重组，然后导入宿主细胞表达
b.将目标蛋白注入兔子或其他动物体内获得一抗
c.将样品蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、转移、吸附固定
d.用一抗与之杂交再用二抗检测其是否表达
2 fluorescent real-time PCR
a.提取样品总RNA，再通过超速离心获得mRNA
b.用逆转录酶获得cDNA
c.加入特异性探针
d.利用专门的仪器检测荧光强度即可
3半定量 PCR
a.提取样品总RNA，再通过超速离心获得mRNA
b.用逆转录酶获得cDNA
c.做半定量PCR
4cDNA microarray
5蛋白质芯片
实质就是高通量的分子杂交，免疫酶连反应再运用计算机处理

热心网友时间：2022-06-18 19:18

检测基因表达的方法：
转录水平检测：RT-PCR，real-time PCR，northern blot
翻译水平检测：western blot
还有直接检测，如报告基因、融合荧光蛋白等。

RT-PCR是反转录PCR，是半定量方式。real-time PCR可以精确定量。二者不同。后者为了区别于RT-PCR，一般不缩写。