Folin-酚法(三)操作方法
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发布时间：2024-07-03 14:03
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时间：2024-07-23 17:46
以下是Folin-酚法的详细操作步骤:
1. 标准曲线测定：准备16支试管，其中1支作为空白，3支用于未知样品，其余分成两组。在每组试管中分别加入0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 和1.0毫升标准蛋白质溶液（浓度为250mg/ml），然后用水补至1.0毫升。接着，快速加入5毫升试剂甲，旋涡混合后在室温（20~25℃）放置10分钟。之后，立即加入0.5毫升试剂乙，快速混合。操作时需注意混合速度，避免显色度减弱。放置30分钟后，以空白对照管在700nm处测定吸光度值。以蛋白质量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
操作时需精确控制时间：从加入第一支试管试剂甲开始计时，之后每1分钟依次加入。若超过10分钟，可按需调整加入试剂乙的时间。测定结束后，记录每管的蛋白质含量和吸光度。
2. 样品测定：取1毫升含有20~250微克蛋白质的样品溶液，按照上述步骤操作，用1毫升蒸馏水作为空白对照。可以与标准曲线同时进行，如在标准曲线试管后加入8、9、10号试管。
根据样品的吸光度值，在标准曲线上查出相应蛋白质质量，从而计算样品溶液的蛋白质浓度。但需注意，由于蛋白质中酪氨酸和苯丙氨酸含量不同，显色深度会有所差异，所以该方法适用于相对浓度的测定。
Folin-酚法的原理是磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下，被酚类还原成蓝色反应，蛋白质中的酪氨酸代酚基参与此反应。相比于双缩脲法，Folin-酚法的灵敏度更高。所需试剂包括1%硫酸铜、2%酒石酸钾钠等，按照特定比例混合。Folin-酚试剂需当天使用。
扩展资料
Folin-酚法：（Lowry法）这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难，近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。
