关于T细胞和瘤细胞的问题

发布网友 发布时间：2022-05-06 17:37

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热心网友 时间：2023-10-13 17:17

任何一种病原微生物都具有多种抗原决定簇，因

此，在机体内诱发出来的抗体也必然是多种抗体的混
合物，称为多克隆抗体, 这种抗*剂在医疗中常常 发生非特异*叉反应而出现假阳性结果。 根据Burnet的“克隆选择”学说，每个淋巴B细胞 克隆只能产生一种能识别特异性抗原决定簇的抗体， 这就是单克隆抗体 (monoclonal antibody, McAb)。

单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限 增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释 法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细 胞系而产生的。
制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免 疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。

有的抗原可以用化学合成：地高辛
多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。

1975年，英国剑桥大学的 Kohler and Milstein 成功采用细胞融合技术， 使小鼠的脾细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞 (hybridoma cells)，利用骨髓瘤细胞无限增殖能力，定向产生只作用于某一抗原决定 簇的McAb，这就是著名的杂交瘤技术(hybridoma technique)，被称为免疫 学的一场*。

对小鼠免疫，刺激抗体产生

从脾中分离产生抗 体的细胞

组织培养的骨髓瘤细胞

产抗体的细胞与培养的肿瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞

杂交瘤细胞的筛选 克隆产抗体的杂交瘤细胞 分离单克隆抗体

第二节 单克隆抗体及其制备
一、抗原于动物免疫①

用抗原或免疫原对动物 (小鼠)进行免疫， 得到经抗原刺激产生的淋巴B细胞，用以同 骨髓瘤细胞杂交，是单克隆抗*备的第 一步。 目前培养的骨髓瘤细胞株系多来自小鼠 或大鼠，选择的免疫动物也必须是那些与 小鼠或大鼠种系发生相近的动物，这样才 会克服杂交瘤细胞的不稳定性。
?

第二节 单克隆抗体及其制备
一、抗原于动物免疫②
?

体内免疫法 选择18-20周龄的雌鼠；选择抗原量较多、 且抗原的免疫原性强的免疫原。

① 颗粒性抗原 (细菌、细胞) 107个细胞，向小鼠腹部注射； 间隔1-3周，追加免疫1-2次。 ② 可溶性抗原10-100 ?g/只，加弗氏完全佐剂*，注射，间 隔2-4周，追加不加佐剂的抗原1-2次。 ③ 采集细胞前最后一次静脉注射抗原。
*弗氏完全佐剂 Freund’s Complete Adjuvant：在乳化油中悬浮被杀死的、干制 的分枝杆菌-人结核杆菌或“卡介苗” (Mycobacterium butyricum)细胞。与 抗原混合注射到动物皮下，抗原会缓慢而均匀地被释放出来，诱发动物免 疫系统高效而均一地产生抗体。

第二节 单克隆抗体及其制备
一、抗原于动物免疫③
?

体外免疫法 没有体内免疫条件，或抗原的免疫原性弱时采用。

① 选择4-8周龄的小鼠脾脏，用200目不锈钢网膜制成细胞 悬浮液；
② 加入抗原，使抗原在细胞悬浮液中的浓度控制在0.55.0 ?g/ml； ③ 37℃、5% CO2下培养4-5天，分离脾细胞。

第二节 单克隆抗体及其制备
二、细胞融合于杂交瘤的选择 ①

细胞融合

脾细胞 (1×108)
聚乙二醇 (PEG)
40-50%、Mr=4000

骨髓瘤细胞 (2-3×107)
为了增加融合率，可以在PEG 溶液中加入二甲基亚砜 (DMSO)

融合2分钟 用缓冲液缓慢稀释

注意：PEG和DMSO对细胞有毒，必须 严格控制二者同细胞的接触时间。可以 在融合前对混合细胞低速离心5分钟， 先使细胞之间接触紧密。

第二节 单克隆抗体及其制备
二、细胞融合于杂交瘤的选择 ②
杂交瘤细胞的筛选

融合处理后，混合溶液中可以产生5种细胞： 脾-脾、瘤-瘤、脾-瘤三种融合细胞， 脾、瘤两种非融合细胞。
必须使用“HAT选择”才能把其中的脾-瘤融合细 胞 (杂交瘤细胞)筛选出来。
?

什么是“HAT选择”？

HAT选择的基本原理与杂交瘤的筛选
HAT培养基因其中含有三种化合物而命名： Hypoxanthine Aminopterin Thymidine 次黄嘌呤： H 氨基喋呤： A 胸腺嘧啶核苷： T
H
HGPRT

HAT培养基用于排除两种基因型细胞： ① hgprt－：缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖 转移酶的细胞不能生长 (骨髓瘤细胞) ② tk－：缺乏胸苷激酶的细胞不能生长 (两 种细胞都不缺乏这个酶，没有选择效应) 小鼠骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞融合的HAT选择

前体分子

dGTP

A

在细胞融合程序中产生五种细胞：
dTTP

T

TK

骨髓瘤细胞： hgprt－，不能生长； 脾细胞： 体外HAT培养不能生长； 脾-脾融合细胞：体外HAT培养不能生长；

细胞中DNA合成所需的脱氧核苷酸 的合成路线及HAT选择原理
HGPRT 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 hypoxanthineguanine phosphoribosyl transferase

瘤-瘤融合细胞：hgprt－，不能生长；
脾-瘤融合细胞：因脾细胞为hgprt＋，可生长；

TK 胸腺嘧啶核苷激酶(胸苷激酶) thymidine kinase

第二节 单克隆抗体及其制备
二、细胞融合于杂交瘤的选择 ③
?将融合后的混合细胞悬浮于HAT培养基中(附加饲养

细胞—小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞或胸腺细胞，这 些细胞释放的细胞因子有利于杂交瘤细胞的繁殖)， 置96孔板内培养6天(每隔2-3天换培养基1/2—2/3)；
?改用HT培养基（即不加氨基喋呤的HAT）培养8天；

?再改用RPMI1640完全培养基继续培养。

*融合后培养的第8-9天就可以对培养液的上清部分 进行抗体检测，逐步选出阳性克隆。

第二节 单克隆抗体及其制备
三、筛选阳性克隆与克隆化 ①

筛选：经过免疫，动物脾细胞中只有5%能够产生
抗体，只有这些细胞与骨髓瘤细胞融合后才 能产生杂交瘤细胞。

融合后的第8-9天，就必须对能够产生 抗体的杂交瘤细胞进行筛选。一般采用酶联 免疫吸附检验法 (enzyme –linked immunosorbent assay, ELISA)。 （P148 图4-3）

第二节 单克隆抗体及其制备
三、筛选阳性克隆与克隆化 ②

克隆：尽早克隆阳性细胞，利于杂交瘤细胞克服不稳定性。

有限稀释法：把阳性克隆悬浮液稀释到每个培养孔内只 有1个细胞；
软琼脂法：用5%的琼脂糖使培养基呈半固体状态，一 个细胞的克隆后代将形成一个细胞团块。但克隆过 程至少要重复3次，才能保证得到100%的阳性克隆。

? 经过这些步骤，得到的每一个克隆就是单细胞克隆。

第二节 单克隆抗体及其制备
四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ① 细胞学鉴定
染色体核型 chromosome karyotype

人的有丝*中期染色体显微图象及核型分析
(外周血白细胞培养染色体涂片)

第二节 单克隆抗体及其制备
四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ① 细胞学鉴定 ? 动物的染色*片技术相对简单，在普通光学显微 镜下就可以确定染色体核型(chromosome karyotype) 。 ? 小鼠的染色体全部都是端部着丝点染色体，2n=40； 骨髓瘤细胞染色体数目大于40，2n＞40，并且有骨 髓瘤特有的标记染色体。所以，杂交瘤细胞的染色 体数目应该是两种细胞染色体数之和。

? 由于有HAT选择在前，用核型分析确定杂交瘤细胞 只有一个条件：2n≥80。

第二节 单克隆抗体及其制备
四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ② 抗体性状的鉴定

小鼠脾的淋巴B细胞是多克隆的，每个杂交 瘤细胞系产生的抗体都是由抗原的一个决定簇 诱发的单克隆抗体。必须对这些单克隆的淋巴 B细胞各自产生的抗体做免疫性状的鉴定。
杂交瘤细胞所分泌的抗体的生 物学特性的鉴定，要按照单克隆 抗*备要求，进行各种指标的 鉴定。

第二节 单克隆抗体及其制备
五、单克隆抗体的大量制备 ① 动物体内诱生法： 选用杂交瘤亲本动物，腹腔注射有机溶剂降 植烷 (姥鲛烷 pristane) 0.5 ml，1-2周后注射杂交瘤 细胞1×106个，7-12天后分几次抽取生成的腹水， 离心取上清，冻存。

这个方法一般可获得抗体5-20 mg/ml，操作简 单经济。但由于腹水中有多种杂蛋白，给纯化带 来困难。

第二节 单克隆抗体及其制备
五、单克隆抗体的大量制备 ②

体外培养法：
?

用RPMI1640培养基，添加10-20%的胎牛或小牛血 清 (BSA)，直接体外培养杂交瘤细胞； 抗体产率达到5-20 ?g/ml； 如果用白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺等混 合物代替小牛血清，可以减少支原体的感染，但 产率不高。

? ?

第二节 单克隆抗体及其制备
五、单克隆抗体的大量制备 ③
?

连续悬浮培养技术 微载体悬浮培养法，培养基添加DEAESephadex A50 (二乙基氨基乙基-葡聚糖)固体颗粒， “锚定” (anchoring) 杂交瘤细胞，利于旺盛生长；

?

?

细胞密度可达到107-108/ml，抗体产率可提高到 400-4000 ?g/ml。

第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ①
?

动物体内诱生法制备的单克隆抗体的纯化

⑴ 澄清和沉淀处理：
?

1,000×g 离心 5 min后取上清，除去红细胞、细胞碎块、 纤维蛋白凝块、脂质；再用20,000 ×g 离心 30 min，取 上清去除残留的小颗粒物质； 用 0.2 ?m微孔滤膜过滤：去除污染的细菌、支原体和脂 质； 用50%饱和(HN4)2SO4沉淀，可回收90%以上的单克隆抗 体。

?

?

第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ②

⑵ 分离：凝胶过滤、阴离子交换层析、免疫亲和层析
① 凝胶过滤：用Sephadex G200过柱分离，最 高峰为IgM类单克隆抗体，另两个峰值为IgG类。
样品自动被传输到样品瓶中， 然后被提取到定量环中，进入GPC 柱进行分析。高分子量的部分被洗 脱到废液瓶中，其他待分析物被收 集到样品瓶中，以便进一步分析 (或者进行在线蒸发)。
AS-2000凝胶过滤系统

第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ③
② 阴离子交换层析： ? 杂交瘤上清液: 澄清沉淀(调pH 5.5) ? 过EDAE-G (二乙基氨基乙基纤维素)柱，所有的 抗体都结合到柱上，同时除去了55%的杂蛋白。

? 用不同的pH值和不同离子强度的洗脱液洗脱不 同亚基的单克隆抗体。 ? 高容量、高流速、化学稳定的新型离子交换剂 适宜单克隆抗体的大规模纯化。

第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ④ ③ 免疫亲和层析：用固定化的A蛋白 (从金*葡萄球菌中 分离) ? 1 ml protein A-Sepharose CL-4B柱； ? 平衡缓冲液：1.5 mol/L Gly-NaOH (pH 8.9)，内含3 ml/L NaCl； ? 洗脱缓冲液：0.1 mol/L 柠檬酸(调不同pH值) pH 6.0 / IgG1 pH 4.5 / IgG2a pH 4.0 / IgG3 pH 3.5 / IgG2b pH 3.0 洗涤追问B细胞如此，那T细胞呢？

热心网友 时间：2023-10-13 17:17

任何一种病原微生物都具有多种抗原决定簇，因

此，在机体内诱发出来的抗体也必然是多种抗体的混
合物，称为多克隆抗体, 这种抗*剂在医疗中常常 发生非特异*叉反应而出现假阳性结果。 根据Burnet的“克隆选择”学说，每个淋巴B细胞 克隆只能产生一种能识别特异性抗原决定簇的抗体， 这就是单克隆抗体 (monoclonal antibody, McAb)。

单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限 增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释 法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细 胞系而产生的。
制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免 疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。

有的抗原可以用化学合成：地高辛
多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。

1975年，英国剑桥大学的 Kohler and Milstein 成功采用细胞融合技术， 使小鼠的脾细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞 (hybridoma cells)，利用骨髓瘤细胞无限增殖能力，定向产生只作用于某一抗原决定 簇的McAb，这就是著名的杂交瘤技术(hybridoma technique)，被称为免疫 学的一场*。

对小鼠免疫，刺激抗体产生

从脾中分离产生抗 体的细胞

组织培养的骨髓瘤细胞

产抗体的细胞与培养的肿瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞

杂交瘤细胞的筛选 克隆产抗体的杂交瘤细胞 分离单克隆抗体

第二节 单克隆抗体及其制备
一、抗原于动物免疫①

用抗原或免疫原对动物 (小鼠)进行免疫， 得到经抗原刺激产生的淋巴B细胞，用以同 骨髓瘤细胞杂交，是单克隆抗*备的第 一步。 目前培养的骨髓瘤细胞株系多来自小鼠 或大鼠，选择的免疫动物也必须是那些与 小鼠或大鼠种系发生相近的动物，这样才 会克服杂交瘤细胞的不稳定性。
?

第二节 单克隆抗体及其制备
一、抗原于动物免疫②
?

体内免疫法 选择18-20周龄的雌鼠；选择抗原量较多、 且抗原的免疫原性强的免疫原。

① 颗粒性抗原 (细菌、细胞) 107个细胞，向小鼠腹部注射； 间隔1-3周，追加免疫1-2次。 ② 可溶性抗原10-100 ?g/只，加弗氏完全佐剂*，注射，间 隔2-4周，追加不加佐剂的抗原1-2次。 ③ 采集细胞前最后一次静脉注射抗原。
*弗氏完全佐剂 Freund’s Complete Adjuvant：在乳化油中悬浮被杀死的、干制 的分枝杆菌-人结核杆菌或“卡介苗” (Mycobacterium butyricum)细胞。与 抗原混合注射到动物皮下，抗原会缓慢而均匀地被释放出来，诱发动物免 疫系统高效而均一地产生抗体。

第二节 单克隆抗体及其制备
一、抗原于动物免疫③
?

体外免疫法 没有体内免疫条件，或抗原的免疫原性弱时采用。

① 选择4-8周龄的小鼠脾脏，用200目不锈钢网膜制成细胞 悬浮液；
② 加入抗原，使抗原在细胞悬浮液中的浓度控制在0.55.0 ?g/ml； ③ 37℃、5% CO2下培养4-5天，分离脾细胞。

第二节 单克隆抗体及其制备
二、细胞融合于杂交瘤的选择 ①

细胞融合

脾细胞 (1×108)
聚乙二醇 (PEG)
40-50%、Mr=4000

骨髓瘤细胞 (2-3×107)
为了增加融合率，可以在PEG 溶液中加入二甲基亚砜 (DMSO)

融合2分钟 用缓冲液缓慢稀释

注意：PEG和DMSO对细胞有毒，必须 严格控制二者同细胞的接触时间。可以 在融合前对混合细胞低速离心5分钟， 先使细胞之间接触紧密。

第二节 单克隆抗体及其制备
二、细胞融合于杂交瘤的选择 ②
杂交瘤细胞的筛选

融合处理后，混合溶液中可以产生5种细胞： 脾-脾、瘤-瘤、脾-瘤三种融合细胞， 脾、瘤两种非融合细胞。
必须使用“HAT选择”才能把其中的脾-瘤融合细 胞 (杂交瘤细胞)筛选出来。
?

什么是“HAT选择”？

HAT选择的基本原理与杂交瘤的筛选
HAT培养基因其中含有三种化合物而命名： Hypoxanthine Aminopterin Thymidine 次黄嘌呤： H 氨基喋呤： A 胸腺嘧啶核苷： T
H
HGPRT

HAT培养基用于排除两种基因型细胞： ① hgprt－：缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖 转移酶的细胞不能生长 (骨髓瘤细胞) ② tk－：缺乏胸苷激酶的细胞不能生长 (两 种细胞都不缺乏这个酶，没有选择效应) 小鼠骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞融合的HAT选择

前体分子

dGTP

A

在细胞融合程序中产生五种细胞：
dTTP

T

TK

骨髓瘤细胞： hgprt－，不能生长； 脾细胞： 体外HAT培养不能生长； 脾-脾融合细胞：体外HAT培养不能生长；

细胞中DNA合成所需的脱氧核苷酸 的合成路线及HAT选择原理
HGPRT 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 hypoxanthineguanine phosphoribosyl transferase

瘤-瘤融合细胞：hgprt－，不能生长；
脾-瘤融合细胞：因脾细胞为hgprt＋，可生长；

TK 胸腺嘧啶核苷激酶(胸苷激酶) thymidine kinase

第二节 单克隆抗体及其制备
二、细胞融合于杂交瘤的选择 ③
?将融合后的混合细胞悬浮于HAT培养基中(附加饲养

细胞—小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞或胸腺细胞，这 些细胞释放的细胞因子有利于杂交瘤细胞的繁殖)， 置96孔板内培养6天(每隔2-3天换培养基1/2—2/3)；
?改用HT培养基（即不加氨基喋呤的HAT）培养8天；

?再改用RPMI1640完全培养基继续培养。

*融合后培养的第8-9天就可以对培养液的上清部分 进行抗体检测，逐步选出阳性克隆。

第二节 单克隆抗体及其制备
三、筛选阳性克隆与克隆化 ①

筛选：经过免疫，动物脾细胞中只有5%能够产生
抗体，只有这些细胞与骨髓瘤细胞融合后才 能产生杂交瘤细胞。

融合后的第8-9天，就必须对能够产生 抗体的杂交瘤细胞进行筛选。一般采用酶联 免疫吸附检验法 (enzyme –linked immunosorbent assay, ELISA)。 （P148 图4-3）

第二节 单克隆抗体及其制备
三、筛选阳性克隆与克隆化 ②

克隆：尽早克隆阳性细胞，利于杂交瘤细胞克服不稳定性。

有限稀释法：把阳性克隆悬浮液稀释到每个培养孔内只 有1个细胞；
软琼脂法：用5%的琼脂糖使培养基呈半固体状态，一 个细胞的克隆后代将形成一个细胞团块。但克隆过 程至少要重复3次，才能保证得到100%的阳性克隆。

? 经过这些步骤，得到的每一个克隆就是单细胞克隆。

第二节 单克隆抗体及其制备
四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ① 细胞学鉴定
染色体核型 chromosome karyotype

人的有丝*中期染色体显微图象及核型分析
(外周血白细胞培养染色体涂片)

第二节 单克隆抗体及其制备
四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ① 细胞学鉴定 ? 动物的染色*片技术相对简单，在普通光学显微 镜下就可以确定染色体核型(chromosome karyotype) 。 ? 小鼠的染色体全部都是端部着丝点染色体，2n=40； 骨髓瘤细胞染色体数目大于40，2n＞40，并且有骨 髓瘤特有的标记染色体。所以，杂交瘤细胞的染色 体数目应该是两种细胞染色体数之和。

? 由于有HAT选择在前，用核型分析确定杂交瘤细胞 只有一个条件：2n≥80。

第二节 单克隆抗体及其制备
四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ② 抗体性状的鉴定

小鼠脾的淋巴B细胞是多克隆的，每个杂交 瘤细胞系产生的抗体都是由抗原的一个决定簇 诱发的单克隆抗体。必须对这些单克隆的淋巴 B细胞各自产生的抗体做免疫性状的鉴定。
杂交瘤细胞所分泌的抗体的生 物学特性的鉴定，要按照单克隆 抗*备要求，进行各种指标的 鉴定。

第二节 单克隆抗体及其制备
五、单克隆抗体的大量制备 ① 动物体内诱生法： 选用杂交瘤亲本动物，腹腔注射有机溶剂降 植烷 (姥鲛烷 pristane) 0.5 ml，1-2周后注射杂交瘤 细胞1×106个，7-12天后分几次抽取生成的腹水， 离心取上清，冻存。

这个方法一般可获得抗体5-20 mg/ml，操作简 单经济。但由于腹水中有多种杂蛋白，给纯化带 来困难。

第二节 单克隆抗体及其制备
五、单克隆抗体的大量制备 ②

体外培养法：
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用RPMI1640培养基，添加10-20%的胎牛或小牛血 清 (BSA)，直接体外培养杂交瘤细胞； 抗体产率达到5-20 ?g/ml； 如果用白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺等混 合物代替小牛血清，可以减少支原体的感染，但 产率不高。

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第二节 单克隆抗体及其制备
五、单克隆抗体的大量制备 ③
?

连续悬浮培养技术 微载体悬浮培养法，培养基添加DEAESephadex A50 (二乙基氨基乙基-葡聚糖)固体颗粒， “锚定” (anchoring) 杂交瘤细胞，利于旺盛生长；

?

?

细胞密度可达到107-108/ml，抗体产率可提高到 400-4000 ?g/ml。

第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ①
?

动物体内诱生法制备的单克隆抗体的纯化

⑴ 澄清和沉淀处理：
?

1,000×g 离心 5 min后取上清，除去红细胞、细胞碎块、 纤维蛋白凝块、脂质；再用20,000 ×g 离心 30 min，取 上清去除残留的小颗粒物质； 用 0.2 ?m微孔滤膜过滤：去除污染的细菌、支原体和脂 质； 用50%饱和(HN4)2SO4沉淀，可回收90%以上的单克隆抗 体。

?

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第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ②

⑵ 分离：凝胶过滤、阴离子交换层析、免疫亲和层析
① 凝胶过滤：用Sephadex G200过柱分离，最 高峰为IgM类单克隆抗体，另两个峰值为IgG类。
样品自动被传输到样品瓶中， 然后被提取到定量环中，进入GPC 柱进行分析。高分子量的部分被洗 脱到废液瓶中，其他待分析物被收 集到样品瓶中，以便进一步分析 (或者进行在线蒸发)。
AS-2000凝胶过滤系统

第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ③
② 阴离子交换层析： ? 杂交瘤上清液: 澄清沉淀(调pH 5.5) ? 过EDAE-G (二乙基氨基乙基纤维素)柱，所有的 抗体都结合到柱上，同时除去了55%的杂蛋白。

? 用不同的pH值和不同离子强度的洗脱液洗脱不 同亚基的单克隆抗体。 ? 高容量、高流速、化学稳定的新型离子交换剂 适宜单克隆抗体的大规模纯化。

第二节 单克隆抗体及其制备
六、单克隆抗体的纯化 ④ ③ 免疫亲和层析：用固定化的A蛋白 (从金*葡萄球菌中 分离) ? 1 ml protein A-Sepharose CL-4B柱； ? 平衡缓冲液：1.5 mol/L Gly-NaOH (pH 8.9)，内含3 ml/L NaCl； ? 洗脱缓冲液：0.1 mol/L 柠檬酸(调不同pH值) pH 6.0 / IgG1 pH 4.5 / IgG2a pH 4.0 / IgG3 pH 3.5 / IgG2b pH 3.0 洗涤追问B细胞如此，那T细胞呢？