发布网友 发布时间:2023-10-17 10:28
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热心网友 时间:2024-12-06 13:45
qRT-PCR和RT-PCR当然不是一种,一般qRT-PCR就是你后边提到的那一串英文,中文叫做实时定量PCR,这个不是半定量,southern杂交和Northern杂交才属于半定量。而RT-PCR通常指的是反转录PCR,英文是reverse transcription PCR,就是先将mRNA反转录成cDNA,然后再以cDNA为模板,用PCR方法加以扩增。
半定量:
半定量是RT-PCR做基因表达分析的一种方法,其操作的方法是在野生型和突变体中用一个看家基因(通常是actin)做参照标准来观察目标基因在各自的表达情况(上调还是下调),所谓半定量的"半"是通俗的说法,即在看电泳图估计参照亮度一致(可看作是表达的细胞数一致)情况下,确定目标基因的表达;这是与更加精确的Q-PCR的相对定量和绝对定量的区分。
热心网友 时间:2024-12-06 13:45
当然不是一种,一般qRT-PCR就是你后边提到的那一串英文,中文叫做实时定量PCR,这个不是半定量。而RT-PCR通常指的是反转录PCR,英文是reverse transcription PCR,就是先将mRNA反转录成cDNA,然后再以cDNA为模板,用PCR方法加以扩增。热心网友 时间:2024-12-06 13:46
PCR是聚合酶链式反应,这个不多说了。热心网友 时间:2024-12-06 13:46
RT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物,使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。在扩增反映结束之后,可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行半定量分析,但分析的是PCR终产物,不能准确分析未经PCR信号放大之前的起始模板量。我们在提取到RNA后用BIOG taq酶进行反转录生成cDNA,然后以cDNA为模板进行检测