PCR技术中,dntp作用原理是什么?为什么不用脱氧核苷酸呢?
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发布时间：2022-04-30 13:25
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热心网友
时间：2022-06-22 14:27
是合成脱氧核糖核酸的“最小单位”
跟供能什么的完全没关系
看完问题补充我都囧了。。。
http://www.supermt.com.tw/e/molbio/lecture_1/4103.pdf
看上面这个pdf文档里有解释
dna聚合酶的焦磷酸交换作用：催化dntp末端的ppi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32p32pi＋dnppp←dnp32p32p＋ppi→dna
dna复制时脱氧核苷酸链的延伸使用的原料是dntps,生成焦磷酸并延伸一个dnmp,这一步反应近似可逆,而焦磷酸在焦磷酸酶的催化下迅速分解为两个磷酸,使得反应的总吉布斯自由能大幅降低,导致总反应不可逆并且使该反应极易发生.这是细胞内典型的焦磷酸解驱动的反应之一,还有糖原的磷酸解,trna与氨基酸的结合反应等等都是焦磷酸解驱动的反应.
不都是核苷酸么？带磷酸基不也叫核苷酸？。。。
一个碱基+一个脱氧核糖+两个磷酸基=dndp。。。
dntp也是要变成dnmp才参与组成的，，，
热心网友
时间：2022-06-22 14:27
这里涉及一个气溶胶的概念，气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，能在空气中滞留至少几个小时。PCR反应过程中不断进行升温降温，液体蒸发又冷凝，PCR管中空气的部分形成了气溶胶，携带了大量DNA扩增产物（注意1ng扩增产物中可作为模板的DN*段的数量超过1ng起始模板中可扩增DN*段数量的几百万倍甚至更高。比如人的基因组DNA有30亿个bp，要扩增的单拷贝基因片段是300 bp，1ng起始模板中可以作为模板DN*段只占总起始模板DNA总量的千万分之一）。如果在实验室打开含PCR扩增产物的管盖，大量携带DNA扩增产物的气溶胶就会涌出，扩散到空气中，从而对环境造成污染。虽然在整个空间环境中DNA的含量很低，但是由于理论上只要有1个可做为模板的DNA 片段也能PCR扩增成功，这就是为什么在污染环境中阴性对照也能扩增出条带的原因。
所以在专业的PCR实验（比如临床PCR检验实验室）室通常有四区隔离（或至少是三区隔离）的要求。
常见的三区指的是：
1、试剂配制区：PCR反应体系的配制区域。
2、标本处理区：包括扩增模板的制备，也就是我们常常提取DNA的地方；
3、PCR扩增和产物分析区：进行PCR扩增的区域，也是扩增产物进行凝胶电泳分析的区域。
如果将PCR扩增区域和产物分析区再次分开，就是四区隔离了。
四区隔离，主要目的是防止气溶胶在各个PCR区域之间的流动—最好的方法是干脆每个区域隔一幢楼，那肯定是最佳的隔离措施了，但操作起来肯定不现实，于是便有了针对不同区域设置正负压的方法：
试剂配制区（Ⅰ区）：最洁净的区域，保持微正压使得外界空气无法进入隔离污染源。并且阴性模板应该在此区加入PCR管并盖盖，严禁在此区域打开、存放装有DNA模板的离心管；
DNA模板添加区（Ⅱ区）：保持微负压，保证内部空气不外泄，以免阳性模板的气溶胶对外界环境造成污染。
扩增及PCR产物分析区（Ⅲ区）：保持微负压，使得内部空气不外泄，以免扩增产物的气溶胶对外界环境造成污染。
热心网友
时间：2022-06-22 14:28
热心网友
时间：2022-06-22 14:29
DNA聚合酶的焦磷酸交换作用：催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。反应式为32P32Pi＋dNPPP←dNP32P32P＋PPi→DNA
DNA复制时脱氧核苷酸链的延伸使用的原料是dNTPs,生成焦磷酸并延伸一个dNMP,这一步反应近似可逆,而焦磷酸在焦磷酸酶的催化下迅速分解为两个磷酸,使得反应的总吉布斯自由能大幅降低,导致总反应不可逆并且使该反应极易发生.这是细胞内典型的焦磷酸解驱动的反应之一,还有糖原的磷酸解,tRNA与氨基酸的结合反应等等都是焦磷酸解驱动的反应.
不都是核苷酸么？带磷酸基不也叫核苷酸？。。。
一个碱基+一个脱氧核糖+两个磷酸基=dNDP。。。
dNTP也是要变成dNMP才参与组成的
