酵母双杂交实验操作步骤大全的信息你有吗?

发布网友发布时间：2022-04-30 16:15

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热心网友时间：2022-06-27 05:44

最近在做龙须菜高温胁迫表达cDNA文库的构建，选择的是CaM做诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM，利用SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中，搜集了部分资料找到了一份比较全的酵母双杂交实验操作步骤。
一.酵母双杂交系统的原理
酵母的转录激活因子GAL4由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域(domain)组成，N端有一个由147个氨基酸组成的DNA结合域(DNA binding domain,BD)，C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域(transcription activation domain,AD)。BD可以和上游激活序列(upstream activating sequence，UAS)结合，而AD则能激活UAS下游的基因进行转录。但是，单独的BD或AD不能激活基因转录，它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的功能。酵母双杂交系统主要利用酵母的GAL4的这个特性通过两个杂交蛋白在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来研究活细胞内蛋白质的相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因敏感地检测到。酵母双杂交技术不仅应用于哺乳动物蛋白质之间的相互作用研究，还可以用来研究高等植物蛋白质之间的相互作用。
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详细资料请参考：on
http://www.bio1000.com/experiment/protein/353667.html