要得到正确的革兰氏染色结果必须注意那些操作?关键在那几步?为什么...

发布网友 发布时间：2022-05-01 14:12

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懂视网 时间：2023-02-11 12:05

注意事项

１、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

２、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。

３、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。

实验流程

１、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用马克笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

２、涂片

液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近５厘米左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径２毫米左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。

３、晾干：让涂片在空气中自然干燥。

４、固定：让菌膜朝上，通过火焰２－３次固定（以不烫手为宜）。

５、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染１分钟。

６、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。

７、媒染：滴加１滴碘液，染１分钟，水洗。

８、脱色：吸去残留水，连续滴加９５％乙醇脱色２０－３０秒至流出液无紫色，立即水洗。

９、复染：滴加蕃红复染３－５分钟，水洗。至此，革兰氏染色结束。

热心网友 时间：2023-02-11 09:13

热心网友 时间：2023-02-11 10:31

热心网友 时间：2023-02-11 12:05

革兰氏染色：（1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。（2）晾干：与简单染色法相同。（3）固定,与简单染色法相同。（4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上,加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1分钟。（5）水洗：倾去染色液,用水小心地冲洗。（6）媒染：滴加卢哥氏碘液,媒染1min。（7）水洗：用水洗去碘液。（8）脱色：将玻片倾斜,连续滴加95%乙醇脱色20—25s至流出液无色,立即水洗。（9）复染：滴加蕃红复染5min。（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。（11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水纸吸干。（12）镜检：镜检时先用低倍,再用高倍,最后用油镜观察,并判断菌体的革兰氏染色反应性。（13）实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净,a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去.b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次.c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次.注意擦镜头时向一个方向擦拭。②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净.1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色.如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌.脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响,难以严格规定。2.染色过程中勿使染色液干涸.用水冲洗后,应吸去玻片上的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。3.选用幼龄的细菌.G+菌培养12h-16h,E.coli培养24h.若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。

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回答我毕竟不是这个专业的人员，要在网络的各个网站或在题库中找答案

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