如何设计引物，给出了一个基因的片段4

发布网友发布时间：2023-11-16 21:00

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热心网友时间：2024-01-04 07:06

其实不难，没有必要那么着急。首先，缩小引物长度，PCR扩增序列长度和设计引物长度没有太多必然联系（我经常用15bp引物扩增9K+的序列也没有任何问题），使Tm值一定小于72°C，引物至少保持在12bp以上（如果你不放心，可以用NCBI的序列比较查看一下你的引物和你要扩增的基因是否有其他非特异性结合，Tm值对于PCR十分关键，高Tm值引物很难得到预期产物）。如果Tm始终不能低于72°C，就使用72°C进行退火和延伸两个步骤，不过我不看好实验结果。如果引物与模板有非特异性结合可能性，可以在PCR中适当减少退火时间（几秒钟）。PCR后电泳跑胶，如果有较多非特异性条带，可以切割提纯你的目标条带后再跑一次PCR。