为什么DNS还原糖实验中标准曲线不做平行样
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发布时间：2023-08-01 04:27
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时间：2023-11-16 16:41
几乎所有植物中都存在淀粉酶,尤其是萌发的禾谷类种子,淀粉酶活性最强.主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶.种子萌发时,淀粉酶活性随萌发时间迅速增加,将淀粉分解成小分子糖类,供幼苗生长.α-淀粉酶随机水解淀粉的α-1,4-糖苷键,作为淀粉分解的起始酶而起主要作用；其水解产物为麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原性糖；β-淀粉酶水解非还原端的第二个α-1,4-糖苷键,水解产物为麦芽糖,并能使一部分糊精糖化.本实验以萌发种子为材料,测定其中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的差异.
【原理】
两种淀粉酶具有不同理化特性,α-淀粉酶不耐酸,在PH3?6以下迅速钝化；β-淀粉酶不耐热,在70℃下15Min则被钝化.据此,在测定时钝化其中之一,就可以测定出另一种酶的活力,本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶活力,再与非钝化条件下测得的总淀粉酶活力比较,求出β-淀粉酶活力.淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3,5-二硝基水杨酸试剂反应,使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸.在一定范围内,其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比,可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示,用比色法测定淀粉生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力.
【仪器与用具】
分光光度计；离心机；恒温水浴器；研钵；具塞刻度试管25Ml 13支,刻度吸管1ml、2ml、5Ml各1支；容量瓶50Ml 2支.
【试剂】
麦芽糖标准液(1Mg／Ml)：称取100Mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100Ml.
DNS试剂(3,5-二硝基水杨酸)：精确称取3,5-二硝基水杨酸1g,溶于20Ml 12Mol／L NAOH溶液中,加入50Ml蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100Ml.盖紧瓶塞,勿使CO2进入.若溶液混浊,可过滤后使用.
1Mol／L PH5?6的柠檬酸缓冲液：A液(0?1Mol／L柠檬酸)：称取分析纯柠檬酸21?01g,用蒸馏水溶解并定容至1L；B液（0?1Mol／L柠檬酸钠）：称取柠檬酸钠29?41g用蒸馏水溶解并定容至1L；取A液55Ml与B液145Ml混匀,即为0?1Mol／L PH5?6的柠檬酸缓冲液.
1％淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100Ml 1Mol／L PH5?6的柠檬酸缓冲液中.
