平末端建库原理

发布网友发布时间：2023-07-09 11:58

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热心网友时间：2023-10-12 02:20

平末端建库的原理：

1. DN*段剪切：PE库的构建首先需要将DNA样本剪切成固定长度的片段，通常长度为200-800bp，原则上最大片段长度与仪器测序能力有关；

2. DNA末端修复：在剪切DN*段之后，需要对末端进行修复以便于后续的DNA连接反应，一般采用多种方式进行修复，如3'端磷酸化、5'端磷酸化、末端加A；

3. DNA连接：将两端修复后的DN*段连接在一起，形成一对配对末端序列，连接反应通常采用T4 DNA ligase酶催化，连接效率影响下游的测序效果；

4. 转化：将连接后的DN*段转化到细胞中，通过宿主细胞的生长和复制实现对DNA序列的扩增；

5. 纯化：从细胞中提取出纯化的DNA样本，进行后续的测序操作。