酵母双杂文库筛选出互作蛋白,然后再怎么做

发布网友发布时间：2022-04-24 12:16

共3个回答

热心网友时间：2022-05-05 04:59

　　然后酵母双杂交技术检测指定蛋白对之间的相互作用。
　　比如：
　　1、诱饵蛋白表达载体与猎物蛋白表达载体的构建
　　2、表达载体转化酵母的验证及自激活活性，毒性检测
　　3、诱饵蛋白质粒与猎物蛋白质粒共转化酵母的验证以及相互作用的检测报告
　　4、无相互作用时诱饵和猎物蛋白的表达情况的Western blotting检测
　　酵母双杂交技术优点：
　　①高效:转化方法简单,转化效率高，便于操作。
　　②灵敏:可检测蛋白质之间的微弱作用。
　　③真实:酵母细胞是真核细胞,融合蛋白之间的相互作用是在真核细胞核内进行的,蛋白质经过翻译后的修饰,多数可以保持蛋白质的天然空间构象和折叠状态,接近其真实的生理状态,一定程度上可代表其在细胞内真实情况。
　　④简捷:只需要构建诱饵表达载体,可以省略蛋白质抽提纯化或抗*备的繁琐步骤。

热心网友时间：2022-05-05 06:17

酵母双杂文库筛选出互作蛋白之后，可以看一下敲除互作蛋白，对目的蛋白有什么影响。
再寻找一下在互作蛋白的突变型中，目的蛋白有什么变化

而且酵母双杂的假阳性很高，最好在原来的研究的生物系统中再验证一下，比如免疫共沉淀实验在验证以便。主要还是看目的蛋白有什么功能，那个互作蛋白又是什么，能够给目的蛋白带来什么变化，把这种互作的功能研究一下，也就能知道目的蛋白的部分作用了。

热心网友时间：2022-05-05 07:52

体外验证。western体外pulldown验证吧