【基本染色方法】常用的染色方法
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发布时间：2023-06-25 05:03
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时间：2023-08-25 09:17
更新时间：2005-12-20 浏览次数：37
一、革兰染色
本染色是最基本的染色法，可用于标本涂片或菌落涂片。染色结果将细菌分为革兰阳性（紫色）和革兰阴性（红色）两类。
原理：
1、 等电点学说。
2、 化学学说。
3、 通透性学说。
试剂
1、结晶紫溶液
A液： 结晶紫 2g
95%乙醇 20ml
B液： 草酸铵 0.8g
蒸馏水 80ml
需在用前24 h将A液，B液混合，过滤后装入试剂瓶内备用。
2、碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300ml
将碘与碘化钾混合并研磨，加入少量水，使其逐渐溶解，然后研磨，继续加入少量蒸馏水至完全溶解。最后补足水量。
也可用少量蒸馏水，先将碘化钾完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
3、脱色液：95%乙醇
4、复染液
A：贮存液：沙黄 2.5g
95%乙醇 100ml
B：应用液：A液 10ml
蒸馏水 90ml
(应用液也可用：石炭酸复红10ml加90ml蒸馏水）
染色方法
1、涂片经火焰固定，加结晶紫液染1min，清水冲去染液。（用滤纸吸去玻片上水分）
2、加碘液染1min，水洗。（吸去水分）
3、加脱色液，不时摇动约10～30秒，至无紫色脱落为止，水洗。（吸去水分）
4、加复染液，染30秒,水洗。（吹干）
5、镜检。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。厚涂片时，须掌握染色时间。如果背景过深，影响镜检。（厚涂片的同时，涂薄片一张）。
原理
分枝杆菌细胞壁含脂质较多其中主要成份为分枝菌酸，此物具有抗酸性，染色时与石炭酸复红结合牢固，能抵抗酸性乙醇的脱色作用，因此抗酸菌能保持复红的颜色，达到染色目的。
试剂
1、萋纳石炭酸复红溶液
碱性复红乙醇饱和溶液（碱性复红8克，溶于95%乙醇100亳升）
碱性复红乙醇饱和溶液： 10ml
5%石炭酸溶液： 90ml
2、脱色剂： 浓盐酸 3ml
95%乙醇 97ml
3、复染液（吕弗勒美蓝液）
美蓝乙醇饱和溶液（美蓝0.3g，溶于95%乙醇30ml中）
美蓝乙醇饱和溶液： 30ml
20%氢氧化钾： 0.1ml
蒸馏水： 100ml
染色方法
1、涂片经火焰固定，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，
切不可沸腾。染5 分钟（若染色奴卡菌需要延长时间），水洗（吸去水份）。
2、加脱色剂，不时摇动玻片至无色脱落为止，水洗（吸去水份）。
3、加复染液，染0.5～1分钟，水洗，吹干。
4、镜检。分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。
三、异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色，异染颗粒可明显地被显示出来。
试剂
甲液： 甲苯胺蓝 0.15g
孔雀绿 0.2g
冰醋酸 1ml
95%乙醇 2ml
蒸馏水 100ml
将各染料先溶于乙醇，然后加入水与冰醋酸的混合液中，充分混合。静置24小时后过滤备用。
乙液： 碘 2g
碘化钾 3g
蒸馏水 300ml
先将碘化钾加入少许蒸馏水（约2ml），充分振摇，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸馏水至300ml。
染色方法
1、涂片经火焰固定，加甲液，染3～5分钟，水洗（吸去水份）。
2、滴加乙液，染1分钟，水洗，吹干。
3、镜检，菌体呈绿色，异染颗粒呈蓝黑色。
四、墨汁染色
用于观察菌体有无荚膜结构，借此鉴定某些细菌，如新型隐球菌
试剂：
印度墨汁、国产优质墨汁或5%黑色素水溶液。
染色方法：
将标本与1 滴染色液在载玻片上混合，加上盖玻片，轻轻压一下使标本混合液变薄（尽量避免产生气泡），在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞。找到后，转换高倍镜确认。
