如何保证定制抗体的特异性?

发布网友发布时间：2022-04-24 09:53

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热心网友时间：2022-06-18 18:04

抗体说白了就是能够特异性的识别空间结构所形成的抗原决定簇，那么就要考虑你所选择的基因片段能否符合抗原决定簇的要求。所以这个时候特异性尤为重要。为选择好的抗原决定簇，应符合以下三点：1．亲水性：大部分抗原决定簇是亲水性的；2．处于结构表面：大部分抗体只与蛋白质表面部分结合；3．有弹性：许多已知的抗原决定簇是在自由活动区域。所以一般来说蛋白质的N端及C端是很好的抗原决定簇区域。抗原性与免疫原性单独的抗原决定簇是不能产生免疫反应，它只有抗原性但没有免疫原性，为使它能具有免疫原性，它必须偶联在载体蛋白上。抗原决定簇的预测对每个氨基酸的表面可接触性(Surface Accessibility)、亲水性(Hydrophilicity)和弹性(flexibility)进行计算可以大体推算出抗原决定簇区域，抗原决定簇区域应综合以上三个特点。目前市面上有几个专业测定软件满足需要：如MacVestor , Protean , GCG等。不过刚刚开始自己制备抗体的话，建议还是找一家经验丰富的公司，看看别人在抗*备这个方向主要的关注方向是哪些，不明白的地方还可以做详细的咨询。我们实验室长期合作的是美国的一家公司名为ABclonal，他们的服务很到位，每一步都会为我耐心解答，建议可以试试。

热心网友时间：2022-06-18 18:05

抗体会被灭活，与抗原一起被分解

热心网友时间：2022-06-18 18:05

人类基因组计划(human genome project, HGP)于1990年正式启动，2005年完成。换句话说，就是人类到了2005年才知道人类基因组的序列，才推断出人类蛋白质组的序列。至于小鼠、大鼠、斑马鱼等等其它物种要排在这后面，当然有些特殊物种到现在也没有测完全部基因组。现在市场上很多市售抗体，生产制备时间早于2005，即便是2005年以后生产的抗体，很多厂家仍然将WB结果与计算分子量相符作为抗体质检的金标准，而忽略了抗体特异性的问题。这就是现在很多商品化抗体不能检测KO样本的原因。要知道，使用没有特异性的抗体，是不能得出可靠结论的，甚至会把研究指引到相反方向。
保证抗体特异性就需要从源头开始，避开同源性序列，设计特异性抗原序列做抗原去免疫动物制备抗体，这一块戴安生物做的很好