用作克隆载体的理想质粒一般具备哪些特点
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发布时间:2022-04-26 19:05
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时间:2023-07-09 19:23
用作克隆载体的理想质粒一般具备下述特点:
①具有松驰型复制子(如ColE1),复制子(replicon)是质粒自我增殖所必不可少的基本条件,并可协助维持使每个细胞含有一定数量的质粒拷贝。
②在复制子外存在几个单一的酶切位点(或多克隆位点),以便目的DN*段插入。
③具有插入失活的筛选标记,理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志,如氨苄青霉素抗性基因(Ampr)和四环素抗性基因(Tetr)等,以便从平板中直接筛选阳性重组子。
④分子量相对较小和较高的拷贝数。此外,质粒的缺点是容量较小,一般只能接受小于15kb的外来DNA,插入片段过大会导致重组子扩增速度减慢,甚至使插入片段失活。主要是对目的基因克隆,建立DNA文库和cDNA文库,其上有复制子即可。