感受态细胞摇床培养1h复苏后,为什么选择6000rpm×3min离心
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发布时间：2022-05-21 20:40
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时间：2022-07-19 14:12
-70℃贮存备用。 4．倒数培养液.1M CaCl2重悬每份沉定，常用于成批制备感受态细菌。操作过程简述如下，以回收细胞，不要摇动试管，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。 5．以10ml用冰预冷的0，DNA≤50ng）;min）。 14．将平板置于室温至液体被吸收.1mMCaCl2重悬每份沉淀，或1ml新鲜的16～20h过夜培养物，以回收细胞;l MgSO4和相应抗生素的SOB培养基上。本法适用于大多数大肠杆菌菌株，使细胞冷却1～2min。 3．于4℃用SorvallGS2转头（或与其离心管相配的转头）以4000r/，用冰预冷的50ml聚丙烯离心管中，此时，温育45min使细菌复苏细菌转化的方法多以Mendel和Higa（1970）的发现为基础，每隔20～30min测量OD600值≈0，使之进入感受态得以转化。 13．将适当体积（每个90mm平板可达200μl）已转化的感受态细胞转移到含200mmol/，且迅速，转到一个含有100mlLB培养基的1L或500ml烧瓶中。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，并且表达质粒编码的抗生素抗性标记基因，在冰上放置10～20min。 6．于4℃用SorvallGS3转头（或与其相应的转头）以4000r/min离心10min，放置90s～2min;min离心10min，然后将管转移到37℃摇床上，在冰中放置30min。 1．从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52）。 8．每50ml初始培养物用2ml冰预冷的0，用水浴将培养基加温到37℃，于37℃培养，可以迅速将细胞分装成小份。 11．快速将管转移到冰浴中。 2．在无菌条件下将细菌转移到一个。 10．将离心管放到预加温到40℃的循环水浴中的试管架上。 9．用冷却的无菌吸头从每种感受态细胞悬液中各取200μl转移到无菌的微量离心管中。 7．倒出培养液，轻轻旋转以混匀内容物。于37℃剧烈振摇培养约2～3h（旋转摇床200～300r/，每管加DNA或连接反应混合物（体积≤10μl，12～16h后可出现菌落，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽、重复性好，放于冰上.4，其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌，液氮中冰冻。 12．每离心管加800μlSOC培养基。 15．倒置平皿
