药物的基本作用实验的实验讨论怎么写
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发布时间：2022-04-22 02:19
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时间：2023-12-03 04:01
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例子
【摘要】 目的 研究中草药半夏超临界CO 2 乙醇萃取物对不同惊厥动物模型的对抗作用。 方法 采用最大电休克和戊四唑惊厥模型，以托吡酯(Topiramate，TPM)为阳性对照，分析ig半夏超临界CO 2 乙醇萃取物小鼠的量效、时效关系及抗惊厥率和死亡率; 结果 半夏超临界CO 2 萃取物和TPM对MES有对抗作用，抗惊厥率分别达80%和90%(P<0.01)，且量效均呈正相关性。其起效时间为30min，1h达峰，作用持续7h。两药均可延长MET惊厥潜伏期(P<0.01)，对抗MET发作。 结论 半夏超临界CO 2 乙醇萃取物可剂量依赖性对抗小鼠最大电休克惊厥，亦可对抗戊四唑惊厥。其抗惊厥作用性质和TPM相似，但抗最大电休克、戊四唑惊厥效应较TPM弱，作用持续时间较TPM短。
关键词 半夏超临界CO 2 乙醇萃取物 托吡酯 最大电休克惊厥 戊四唑惊厥
癫痫是临床常见的多种病因引起的一类临床综合征，治疗难度大，发病率高。我国中医药治疗癫痫已有两千多年历史，不但在中草药治疗癫痫方面积累了丰富的经验，同时具有丰富的抗癫痫中草药资源。半夏有燥湿化痰之功效，查阅近10年的文献尚未见有关抗惊厥作用的动物实验研究资料。为此，我们采用超临界CO 2 流体萃取法(Super-critical-CO 2 Fluid Extraction，SFE-CO 2 )获得半夏超临界CO 2 乙醇萃取物作为研究对象，利用经典的MES、MET惊厥模型，以抗癫痫西药为阳性对照，观察其抗惊厥作用，为中医药治疗癫痫提供理论依据，为半夏的开发利用奠定药理学理论基础。
1 材料
1.1 动物 健康普通级昆明种小鼠，体重18～22g，雌、雄(♀♂)皆用，合格证号为:314第070101号;由山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药品及试剂 实验用半夏(Pinellia Tuber，PT)购于山西省药材公司，经山西医科大学药学系植化教研组鉴定后用于实验。超临界CO2 萃取由山西省康友药业有限公司完成。萃取流程为:原生药(5kg)-粉碎-进样-CO 2 流体压缩-萃取-减压-分离-70%的乙醇作携带剂-得半夏超临界CO 2 乙醇萃取物(supercritical-CO 2 alcohol fluid extrac-tions of Pinellia Tuber)，用前以蒸馏水配制。托吡酯(Topa-max)，瑞士Cilag公司生产，批号02CS063，用生理盐水配制。戊四唑(Metrazol，MET)，荷兰癫痫研究中心惠赠。
2 方法
2.1 最大电休克惊厥(Maximal Electroshock Seizure，MES)实验 采用Swinyard [1] 法稍加改良。用JY-Ⅱ型电惊厥仪(山西医科大学药理教研室研制)两个耳电极夹住小鼠双耳部，按下列电刺激参数刺激:刺激强度70V、时间0.4s。以后肢强直为MES指标。实验前12h筛选动物，凡刺激小鼠未见后肢强直者弃之不用。
取昆明种小鼠260只，随机分为13个剂量组，每组20只，半夏CO 2 乙醇提取物5个剂量组按5.0、10.0、20.0、30.0、60.0(g/kg)ig给药，托吡酯6个剂量组按0.032、0.063、0.125、0.25、0.5、1.0g/kg ig给药，正常对照组ig等容积的生理盐水。各剂量组小鼠ig给药后，分别于15min、30min、1h、2h……12h用上述同样参数刺激，记录抗MES数，计算抗惊厥率，分析各药作用高峰期的量效关系，用Bliss法计算各药的ED 50 、ED 95 ，记录药后的起效时间、达峰时间和作用持续时间。
2.2 抗戊四唑(Metrazol Seizure Test，MET)惊厥实验 取昆明种小鼠30只，随机分为3组，每组10只。(1)半夏CO 2 乙醇提取物组19.49g/kg ig(2)托吡酯组0.22g/kg;(3)正常对照组ig等容积的生理盐水，ig容量0.1ml/10g。药后1h，皮下注射(sc)Met100mg/kg，以全身阵挛性惊厥为观察指标，记录惊厥潜伏期(Seizure Latency，SL)、惊厥数(凡注射戊四唑10min内出现惊厥者为阳性)和死亡数，计算抗惊厥率及死亡率。
2.3 统计学方法 结果均以ˉx±s表示，多样本均数比较采用方差分析，全部数据均使用SPSS统计软件一次性处理，以P<0.05判定有统计学显著差异。
3 结果
3.1 半夏超临界CO 2 乙醇萃取物的抗MES效应
3.1.1 量效关系 Tab1-2和图1显示，以半夏超临界CO 2乙醇萃取物和托吡酯的抗惊厥率为纵坐标，对数剂量为横坐标可作出S形量效曲线，说明两药均有明显的抗MES作用，且量效呈正相关性。前者抗惊厥率达80%(P<0.01)，ED 50 为19.46g/kg，后者抗惊厥率达90%(P<0.01)，ED 50 为0.22g/kg。
3.1.2 时效关系 半夏超临界CO 2 乙醇萃取物和托吡酯的起效时间、达峰时间和作用持续时间见图2。由图可见，半夏超临界CO 2 乙醇萃取物的起效时间均为15min，达峰时间均为30min，作用持续时间为7h，较托吡酯短(12h)。
3.2 半夏超临界CO 2 乙醇萃取物的抗MET效应 Tab3表明，半夏超临界CO 2 乙醇萃取物和托吡酯组分别与对照组比较均使小鼠MET惊厥潜伏期明显延长，差异具有显著性(P<0.01)，抗MET惊厥率为40%，托吡酯为30%，两药与对照组相比差异均无显著性(P>0.05)，而半夏超临界CO 2 乙醇萃取物组小鼠的死亡率为40%，与对照组相比差异无显著性(P>0.05)，与托吡酯(50%)相比亦差异无显著性(P>0.05)。
4 讨论
癫痫是一种发病率高、临床治疗难度大的中枢神经系统常见病。中医理论认为，癫痫的病因是由多种因素导致痰浊内生，痰聚而气逆不顺，或气郁化火，火生风动，挟痰上蒙清窍，横窜经络，内扰神明，而致癫痫发作，与心、肝、脾等脏器有关 [2] 。1993年卫生部制定了“中药新药治疗痫症的临床研究指导原则”，对本病进行了辨证分型，分为风痰闭阻证、痰火内闭证、肝肾亏虚证、气血淤滞证五种类型，在治疗上以化痰、息风、泻火、行气、祛淤、补气等为治疗原则。半夏有燥湿化痰之功效。据报道，单用半夏粉治疗癫痫12例，痊愈5例，显效5例，无效2例 [3] 。目前为止，尚未见半夏抗惊厥作用的动物实验研究资料。本实验结果显示，半夏超临界CO 2 乙醇萃取物有较强的抗MES惊厥作用，最大抗惊厥率可达80%，且量效呈正相关性;可明显延长戊四唑惊厥的潜伏期;说明半夏超临界CO 2 乙醇萃取物对戊四唑惊厥也有良好的对抗效果。时效分析发现，半夏CO 2 醇提物在药后30min起效，1h达作用高峰，抗惊厥作用时间可持续7h。目前公认，MES是癫痫大发作的实验模型，是筛选对抗人类部分性和强直-阵挛性发作有效药物的最有价值的实验方法 [4] 。本实验结果显示，半夏超临界CO 2 乙醇萃取物抗MES效能虽不及托吡酯(最大抗惊率为90%)，但作用性质与托吡酯相似，提示临床应用半夏治疗部分性和强直-阵挛性发作可能有效。戊四唑是GABA受体拮抗剂，主要通过影响与GABA相关的氯离子通道的活性，使中枢抑制功能减弱，神经元过度兴奋，引起癫痫发作。一般认为能明显对抗MET的药物可以治疗人类的癫痫小发作 [4] 。本实验结果显示，半夏超临界CO 2 乙醇萃取物抗MET作用较强，且作用性质与托吡酯相似，提示临床应用半夏治疗癫痫小发作可能有效。综上结果可以推测，半夏是一味有开发价值的抗癫痫中药，我们将在后续的研究中进一步提取其抗痫有效成分并进一步作抗痫谱和抗癫痫机制的深入探讨。
