免疫荧光染色能进行细胞平均荧光强度分析吗

发布网友发布时间：2022-05-08 11:23

共2个回答

热心网友时间：2023-09-16 01:43

(1)你的二抗是用fitc标记的，为避免荧光分解，分装及荧光显微镜观察时均要避光;
(2)封片最好用甘油加0.5mmol/l
ph9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液，后者能使玻片透明;
(3)关于免疫酶染色，如果是用过氧化物酶做标记，就必须用3%h2o2以去除内源性过氧化物酶;2n盐酸需要使用，目的是使dna变性，让br抗体能够充分地与已经掺入的br结合。
做间接法免疫荧光染色，如何设置对照?
参考见解:最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照，看是否非特异性染色。
(1)空白对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。
(2)阴性对照:标本直接滴加二抗，呈阴性反应。
(3)抗原对照:标本加同种动物的未免疫血清，以pbs冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。

热心网友时间：2023-09-16 01:43

细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分钟，PBS洗三遍。4，与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。5.，一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，PBS洗三遍。6，二抗室温2小时，或者37度1半小时，PBS洗三遍。7，最好用DAPI染核，然后直接照荧光片。8，蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。