免疫组织化学常见问题
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发布时间：2024-10-10 10:15
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时间：2024-10-10 10:43
在免疫组织化学实验中，关键的工具包括单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体由一种特定B淋巴细胞克隆通过细胞融合杂交瘤技术在动物体内制备，具有高度特异性。多克隆抗体则是通过纯化抗原免疫动物后，从血清中获得的混合物，包含多个B淋巴细胞克隆的抗体。
实验中常用的标本类型主要有组织标本和细胞标本，前者包括石蜡切片（如病理大片和组织芯片）、冰冻切片，后者涵盖组织印片、细胞爬片和细胞涂片。石蜡切片是最常见的组织标本制作方式，它能保持组织形态，便于连续切片和染色观察，适合长期保存和回顾性研究。然而，固定过程中可能会封闭部分抗原，因此需要通过抗原修复来恢复其空间结构，常用的方法有微波修复、高压加热、酶消化和水煮加热等，使用pH6.0的0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液作为修复液。
染色方法根据标记物的不同，主要有免疫荧光法、免疫酶标法和亲和组织化学法。亲和组织化学法基于物质与组织成分的高度亲和性，尤其在检测微量抗原或抗体在细胞和亚细胞水平的定位时，生物素-抗生物素染色是最常用的方法，其敏感性更高。
扩展资料
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜（包括荧光显微镜、电子显微镜）的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等）。 免疫组化技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫荧光技术，50年代以后逐渐发展建立起高度敏感，且更为实用的免疫酶技术。
免疫组织化学常见问题
在免疫组织化学实验中，关键的工具包括单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体由一种特定B淋巴细胞克隆通过细胞融合杂交瘤技术在动物体内制备，具有高度特异性。多克隆抗体则是通过纯化抗原免疫动物后，从血清中获得的混合物，包含多个B淋巴细胞克隆的抗体。实验中常用的标本类型主要有组织标本和细胞标本，前者包括...
免疫组织化学的常见问题
产生的原因有以下几个方面：1. 抗原特异性指用于免疫动物的抗原性物质中含有多种抗原分子，它引起动物产生针对多种抗原分子特异性的相应抗体。任何其它物质只要含有一种或多种与上述物质相同的抗原分子，必将与上述多特异性的抗血清发生交叉反应。2. 共同决定簇即两种抗原分子中都含有相同的抗原决定簇。3....
10步填上免疫组织化学 (IHC) 的坑
免疫组织化学 (Immunohistochemistry，IHC) 是利用抗体识别抗原原理，通过化学反应进行染色，以定位、量化组织细胞内大分子。IHC 实验并非难以执行，却经常因细枝末节而令结果不尽人意。以下为 IHC 中应注意的关键细节。固定是使用化学试剂处理样本，凝固并保持抗原活性，且避免自溶。良好的固定剂应具备高渗透...
10步填上免疫组织化学 (IHC) 的坑
6. 血清封闭：使用血清封闭避免一抗与非特异性组织结合，降低假阳性风险。7. 抗体浓度和孵育时间：一抗和二抗的浓度需依据抗体说明书调整，孵育时间影响染色效果，推荐低温慢孵。8. 选择抗体和筛选：利用The Human protein atlas和CiteAb等资源，选择高质量的抗体，并根据引文数量优化筛选。9. 切片清洗和...
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9. **图片分析**：使用图像分析软件如ImageJ或IHC Profiler对结果进行定量分析，确定细胞或组织的免疫反应强度。10. **图像分析**：通过软件如IHC Profiler对胞浆或胞核着色的IHC图片进行自动评分，评估免疫反应的强度。掌握这些步骤，将有助于你在IHC实验中避免常见问题，获得高质量的结果。
做免疫组化前注意什么
4、抗选择单克隆抗体易出现阴性结果，因为灵敏度低但特异性好；一抗的speciesreactivity中无检测组织的种属，这是比较常见的错误；一抗选择rat，而二抗是抗mouse/rabbit等均有可能出现阴性结果。5、抗体孵育时间过短，容易导致阴性结果。一般一抗我建议4℃孵育过夜和37℃复温45min；二抗我一般37℃30min。
免疫组织化学的应用的基本原则
2．辨认细胞产物的来源。利用某些细胞产物为抗原，制备相应的抗体，对组织细胞实施免疫组织化学染色，以确定细胞产物的来源。如内分泌细胞产生的各种激素，大多数可用免疫组化染色技术辨认，据此可研究细胞的分泌功能及对内分泌肿瘤作功能分类，检测分泌异位激素的肿瘤等，了解细胞分化程度。3．确定细胞的分化...
免疫组织化学的对照实验
胰岛用于胰岛素、高血糖素阳性对照。缺乏对照实验的免疫组织化学结果缺乏科学性，不予专业评审与读者认可。完整的对照实验及不同结果的可能原因见下表。若进行同一待检抗原分子的连续检测，通常仅在序列检测之初进行一次完整的对照实验，后续可保留个别对照（如空白和替代对照），以便及时发现问题。
二抗为什么没有鼠抗鼠
稀释度不行。在免疫组织化学常见问题里，一抗为鼠源性抗体，二抗没有使用抗鼠的抗体，主要是稀释度不行。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。
免疫组织化学染色过程中需要通透吗?为什么?
如果切片有邹折，免疫组化染色后，在邹折的地方有深浅不一的颜色，这是一种假阳性，容易引走混淆。切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂。免疫组织化学染色前的前期准备工作，就是必须对新的载玻片进行处理，新的载玻片表面看起来很干净，有人认为不需要进行任何的处理，都能够适合使用，这是一种...
