技术|Luciferase 报告基因系统方法及原理介绍

其原理简述如下：（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

技术解析：Luciferase报告基因系统，以其独特的生物发光机制，提供了基因表达检测的灵敏工具。这种系统利用荧光素酶催化荧光素氧化产生的生物荧光，通过化学发光仪进行测定，揭示转录因子与目标基因启动子的互动。其核心原理是通过荧光素酶与特定DNA序列结合，反映基因表达调控的过程。实验步骤如下：首先，细胞在...

Luciferase 报告基因系统是一种生物技术工具，它利用生物发光现象来监测基因表达。该系统的核心在于荧光素酶与荧光素的反应。荧光素酶，作为一种催化剂，能将荧光素转化为氧化荧光素，这个过程会释放出可见的生物荧光，通过荧光测定仪进行测量。其优点在于灵敏度高，操作简便，可用于定量分析。这种系统在基因...

双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。双荧光素酶报告基因实验是一种基因表达定量分析技术，通过将双荧光素酶Luciferase作为报告基因插入到需要研究的靶基因启动子区域或转录后区域，使其与靶基因协同表达。当荧光素基质（Luciferin）被添加时，双荧光素...

荧光素酶报告基因系统是一种利用生物发光原理进行基因表达检测的技术。其核心是荧光素酶，源于萤火虫的生物发光机制。荧光素(luciferin)在荧光素酶(firefly luciferase)的作用下，会被氧化成oxyluciferin，这个过程中会产生生物荧光，这种现象被称作生物发光。通过荧光测定仪，例如化学发光仪或液闪测定仪，可以...

可对荧光素酶报告基因的转录进行间接估计.荧光素酶易被蛋白酶降解,在转染的哺乳动物细胞中的半衰期约为3 小时.荧光素酶报告系统为启动子活性的检测提供了一个敏感、快速、非放射性的检测方法.荧光素酶报告基因检测试剂盒(Luciferase Reporter Gene Assay Kit),是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光...

1、 实验简介 Luciferase报告基因系统是以 荧光素(luciferin) 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 (fireflyluciferase)活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光(波长540-600nm),且光强能反应荧光素酶的表达量。荧光素酶的蛋白表达量与启动子活性、mRNA的稳定性及翻译效率相关。从而将待测启动子、UTR等序列与荧光...

荧光素酶报告基因：揭示生物发光的秘密与广泛应用\n\n荧光素酶报告基因（Luc），如同萤火虫的神秘光点，是一种基于荧光素(luciferin)与萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)的生物标记技术。这个系统巧妙地利用酶促反应，当荧光素酶催化luciferin氧化成oxyluciferin时，释放出熠熠生辉的生物荧光，成为科研领域的...

一．细胞方法 将带有荧光素luc转酶报告基因的真核表达重组质粒pRc/CMV2-7，利用G418筛选，获得稳染人乳腺癌细胞株MCF-7-luc，并在稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆MCF-7体外评价其发光能力。通过建立裸鼠移植瘤模型，利用活体生物发光成像系统检测肿瘤生长及转移情况，为下一步监测裸鼠移植瘤对药物作用的...

二、实验原理 利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的...