定点突变多点突变
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发布时间：2024-08-20 11:09
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时间：2024-09-02 18:49
在科学研究中，有时候需要对多个位点进行定点突变，以探究酶的活性优化、蛋白相互作用位点的研究等问题。单点突变往往无法满足这种需求，且重复操作耗时。因此，Stratagene公司推出了QuikChange Multi Site-Directed Mutagenesis kit，一次实验可引入多达5个定点突变。这个工具基于类似Clontech的原理，即设计多个带突变的引物，它们同向结合到同一单链模板，通过PfuTurbo聚合酶的延伸，引物之间形成单链环，经过连接和DpnI消化，最终得到带有多个突变的单链环（mutant ssDNA），并转化至大肠杆菌，形成双链质粒。据数据，引入3个定点突变的效率为60%，而5个突变点的效率则为30%。实验结果中，大约40%的转化质粒可能带有1-2个不同突变，这使得一次实验可获得不同数量突变的质粒，对蛋白结构和功能的研究颇具价值。
与定点突变不同的是，基于PCR的随机突变通过调整条件增加随机错误，适用于对未知蛋白质的全局性分析，也被称为饱和突变。然而，这种方法缺乏目的性，分析过程复杂，且不支持单个位点的多碱基突变，因此在应用上有局限性。对于已知蛋白结构的基因改造，定点突变更具目的性，精确且操作简便，允许更精确地修改基因，被称作“随心所欲”的基因改造技术。
鉴于定点突变技术在蛋白质组学中的广泛应用前景，我们期待未来会有更多改进和发展，让这项技术更加普及和易用。
扩展资料
定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。
