发布网友 发布时间:2024-07-22 17:07
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热心网友 时间:2024-07-26 17:03
逆转录PCR,即通过逆转录酶将一条RNA单链转化为互补DNA(cDNA),这个过程被称为RNA的转录。依赖于RNA的DNA聚合酶在其中起到了关键作用,它首先合成DNA的另一条链,随后通过PCR技术进行指数级扩增。在每次循环中,模板RNA被RNA酶H分解,只留下互补的DNA拷贝。
RT-PCR技术因其极高的灵敏度而备受青睐,尤其在遗传病诊断中,能准确检测极低拷贝数的RNA。它还被广泛用于定量监测特定RNA的浓度,例如与Northern Blot法相比,提供了更为精确的基因表达分析手段。
进行RT-PCR时,模板RNA必须是纯度较高的,不含DNA或蛋白质等杂质。常见的反转录酶包括鸟类成髓细胞性白细胞病毒(AMV)反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒(MMLV)反转录酶,它们是这一过程的基石。
值得注意的是,RT-PCR有时会被误解为实时PCR(real-time PCR),为了与单纯的逆转录PCR区别,它通常被称为定量PCR(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(实时定量PCR)。通过这些缩写,我们可以明确区分这两种技术的不同用途和特性。
RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写。逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。