牛血清蛋白标准曲线制作

发布网友发布时间：2024-09-06 07:35

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热心网友时间：2024-10-14 01:02

在进行牛血清蛋白标准曲线制作时，首先需要准备两种试剂：考马斯亮蓝G-250溶液和标准蛋白质溶液。考马斯亮蓝G-250溶液由100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4后稀释至1000ml，并过滤，最终浓度为0.01%（W/V）考马斯亮蓝G-250，4.7%（W/V）乙醇和8.5%（W/V）H3PO4。标准蛋白质溶液则是纯牛血清蛋白，通过测定蛋白氮含量后，按0.15mol/L NaCl配制成100ug/ml的溶液。实验中需要使用722S型分光光度计和移液管。

制作标准曲线的步骤如下：在试管中，分别加入不同浓度的标准蛋白溶液（0-60ug/ml），再加入固定体积的0.15mol/L NaCl和考马斯亮蓝试剂，摇匀后静置1小时。以1号管为空白对照，测量每个试管在595nm的吸光度(A595nm)。数据将用于绘制标准曲线，横坐标为蛋白含量，纵坐标为A595nm值。

从这些数据中，通过回归分析得出回归方程，或使用Origin等软件绘制并确定线性关系，确保相关系数至少达到0.999以上。在绘图时，应确保两点接近直线且分布在直线两侧。对于实际样品的测定，首先按照上述步骤操作，然后通过标准曲线或回归方程计算出样品的蛋白质含量。样品的A595nm值应在0.1-0.05范围内，如果过大则需稀释后再测量。

在实验过程中，务必注意以下事项：玻璃仪器要彻底清洗，取量要精确，确保仪器干燥且环境稳定，同时使用空白对照以确保测量准确性。通过这些步骤，可以有效地制作和应用牛血清蛋白标准曲线进行蛋白质含量的测定。

扩展资料

牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent。