图位克隆概念

发布网友发布时间：2024-09-29 21:09

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热心网友时间：2024-09-30 04:15

图位基因克隆是一种独特的遗传学技术，最初由Alan Coulson于1986年在剑桥大学提出，被称为定位克隆或Map-based cloning。它的核心理念是通过基因在染色体上的位置来定位和分离基因，而无需预先了解基因的DNA序列或其表达产物的详细信息。实现这一过程需要满足以下条件:

首先，必须有一个遗传分离群体，例如F、DH、BC或RI，这个群体可以根据目的基因的存在与否进行遗传分析。

其次，实施图位克隆需要进行以下几个步骤:

找到与目标基因紧密连锁的分子标记，作为定位的标志。
运用遗传作图和物理作图技术，精确地确定目标基因在染色体上的具体位置。
构建大型插入片段的基因组文库，如BAC库或YAC，这些库包含了整个基因组的片段。
利用与目标基因连锁的分子标记作为探针，筛选出包含目标基因区域的基因组文库片段。
通过克隆技术，构建出目标基因区域的跨叠群，进一步缩小范围。
利用染色体步行、登陆或跳跃技术，获取更大片段的克隆，包含目标基因。
接着，通过亚克隆技术，获得更小的包含目标基因的片段。
最后，通过遗传转化和功能互补实验，验证并确定目标基因的精确碱基序列。

图位克隆技术因其灵活性和无需提前了解基因序列的特性，在基因定位和分离领域中具有重要的应用价值。