CFSE用于大鼠骨髓间充质干细胞体外染色标记实验

发布网友发布时间：2024-09-30 09:58

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热心网友时间：2024-10-03 17:12

骨髓间充质干细胞(BMSCs)在治疗领域因其独特的属性，如取材方便、体外大量扩增和自体移植避免免疫排斥及伦理问题，成为组织工程种子细胞和基因治疗的理想选择。文献指出，MSCs 移植可用于治疗正己烷中毒导致的周围神经病，然而，应用于组织工程和基因治疗前，高效、安全的 BMSCs 标记是首要解决的问题。

CFSE，羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂，是一种可穿透细胞膜并与细胞内氨基不可逆结合的荧光染料，因其标记效率高、容易检测和无放射性而广泛使用。

在 BMSCs 的分离培养过程中，首先将大鼠脱臼处死，进行酒精处理和无菌操作，分离胫骨、股骨并暴露骨髓腔，使用 PBS 冲洗，收集细胞悬液，过滤并离心，弃去上清液。之后，使用含 10 % 胎牛血清的 LG-DMEM 培养液重悬细胞，接种于培养皿，在恒温培养箱中培养，定期换液，直至细胞融合度达 80% ～90%，通过胰酶消化和差速贴壁法进行纯化和扩增。

CFSE 标记涉及使用预先配制的储存液在无菌 PBS 中稀释成所需浓度，选取生长良好的第 3 代 BMSCs 接种于 24 孔板，每孔加入 CFSE 工作液孵育 15 分钟。荧光显微镜下观察到，标记 CFSE 的 BMSCs 细胞膜、细胞质和细胞核发出绿色荧光，整个细胞呈绿色，细胞核的荧光强度最高。标记的 BMSCs 保持良好的细胞形态，呈梭形或多角形。

CFSE（AbMole Cat#M5117）是一种荧光染料，具有较强细胞膜通透性，进入细胞后乙酸基团可被细胞内酯酶水解，丧失膜通透性，保持高荧光活性。此时的 CFSE 形成可激发荧光的蛋白复合物，不会脱离细胞，且不会影响邻近细胞。CFSE 标记 BMSCs 的细胞膜、细胞核及细胞质都带有绿色荧光，且标记细胞的形态不受影响。